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标题:
细胞制备操作SOP
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作者:
guanjun1314
时间:
2015-12-17 08:53
标题:
细胞制备操作SOP
哪位大神有“细胞制备操作SOP”相关的资料提供参考不?叩谢!
作者:
plum
时间:
2015-12-17 10:15
本帖最后由 细胞海洋 于 2015-12-17 12:27 编辑
. v1 i# x. ?# E" V% W
5 l1 q+ O/ A) k+ U5 C ^4 E2 x
这里有个CIK的,你参考一下。取之于民用之于民
作者:
yooung
时间:
2015-12-17 10:54
本帖最后由 细胞海洋 于 2015-12-17 12:27 编辑
6 h6 G- E/ L+ Z- x
: U, e; ~4 i. O% r
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guanjun1314
的帖子
4 p. W7 D4 R: q/ @
: S; T% h/ P5 R, f1 f! o
细胞制备操作SOP?SOP要求非常细,不同的细胞的制备SOP肯定不一样,所以你应该说明是什么细胞的制备操作SOP。
3 A' Q2 |# o% P( ?
另附一份脐带间充质细胞的说明书,其中有部分可以用作SOP的内容。
9 [& R/ q+ J! t. m5 V6 H
作者:
guanjun1314
时间:
2015-12-18 09:48
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yooung
的帖子
/ n, J: x: w! p% j! f/ A
3 y( [6 T; E2 E5 U& R
感谢提醒,我要的主要是针对CIK的,流程我们有,但SOP我真没有
作者:
yooung
时间:
2015-12-18 11:18
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guanjun1314
的帖子
" L! k, _+ |9 g' }% ~+ }
* S8 q! [ G5 f) G' Q0 X
以前也写过一些SOP,我觉得SOP就是把流程细节化,把实际操作文字化,再加些注意事项,套上SOP通用的格式,就可以了。
作者:
guanjun1314
时间:
2015-12-18 15:01
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yooung
的帖子
) r7 a! n+ h( k+ U
% b2 E/ T1 T; c
嗯,建议得好,采纳
作者:
guanjun1314
时间:
2015-12-21 08:49
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plum
的帖子
4 I8 A% x1 @% z
9 _7 }& u% ^" U9 D
非常感谢
作者:
海南小石
时间:
2015-12-21 16:29
本帖最后由 细胞海洋 于 2015-12-22 12:26 编辑
# |: y7 L* h; V3 i& B3 Q- ~
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有一个相关的,希望对你有帮助
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一、目的
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( X O; r5 Y6 Y4 v3 n
MDCK细胞培养是分离流感病毒及相关研究实验的基本技术。疾控中心的所有技术人员,必须按照本文件相关的操作规程进行操作。
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" }4 p; ?/ D1 Q1 n0 S
二、适用范围
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6 v/ _3 d/ @) Y* i2 c+ Y. c
适用于疾控中心所有技术人员 。
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三、程序
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9 d/ ?, U. E: Y; D" y
(一)生物安全要求
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4 x F5 n: X! t% P. s
实验室生物安全级别:BSL-1
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8 T0 N; r, o' t" O7 y4 R' `
所有操作必须在BSL-1实验室的生物安全柜里进行。
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: u; N3 K4 ~* `5 y, g4 W' x( e
(二)材料
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: ~$ j6 V4 J/ A' d
1. 生长成片的MDCK细胞
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4 l* Q7 _( ~, C: C/ n( w
2. 无菌的T25细胞培养瓶
* M; ?% V% t, h. U1 |) L% i
, y5 e, |( U' E0 b. k: x* Y
3. D-MEM培养液(含有L-谷氨酰胺)
0 {& V& P$ ]8 D; J+ v1 c$ s
& @$ {' ]7 c9 a% F9 {4 C4 p
4. 青、链霉素母液(10000 U/mL青霉素G;10000µg/mL硫酸链霉素),分装后保存于-20℃
5 [# K& R! y9 w5 k5 P7 `
2 b) s6 r7 n# m5 N& p9 t. N& P7 E
5. HEPES缓冲液,1M母液
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# `# y. G; U' I2 s( W+ N
6. 胎牛血清
6 |6 k- v8 k0 E$ Y: e
9 W* ~6 R* N/ B7 ~5 J. J
7. EDTA-胰酶(0.05%胰酶,0.53mM EDTA-4Na),分装后保存于-20℃
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; ]+ u$ q: x9 ?7 t" s. N( P3 {7 E
8. 7.5%牛血清白蛋白组分V
7 ^2 T2 X# y/ @& E
! G; }+ ~5 B3 h3 y
9. 1mL、10mL无菌移液管
* s; G" B/ J. u- b7 j
& E- H/ O2 g$ O$ X; ^2 c8 }% W I
10. 70%~75%的酒精
5 [6 p O$ U, `; {: O
& x" v! G& D5 {% ~! V" W3 T
注意事项:经常检查试剂使用的有效期。
& i5 F5 F3 `- T& {: T8 X) C
, J2 _& F+ e! r" K4 i5 H; M
(三)实验步骤
* ?' |! u% }1 k; u, H- K0 r
) R9 c& g( n( q5 r* I2 |6 o" d. f
这里以T75细胞瓶的单层细胞培养为例,叙述MDCK细胞的培养程序。如果细胞瓶的规格有变,MDCK细胞悬液的量必须做相应的调整。
+ J( X- l+ v" ?3 _
9 d+ W! B8 E' |6 i* R
1. D-MEM培养液的准备
) z% L9 @# b+ T: D3 `! S H1 I. B
) g6 O# C# h& r: ^8 V& g
500mL D-MEM液中加入:
5 W2 K& R& ~( F( d8 a! d
5 N: m% z- ]# k, X/ ~
青、链霉素母液5mL(终浓度达:100U/mL青霉素;100µg/mL链霉素),
4 A. [2 t( l* n3 ~
6 ?& q/ q# j% S& l. p
HEPES缓冲液12.5mL(终浓度:25mM)。
$ g( h* i5 A, q8 D! j' b9 c
# r5 n( a$ Y1 S
7.5%牛血清白蛋白组分Ⅴ 12.5mL
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Z. m! M% w' F1 \
2. 细胞生长液的准备
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5 C0 ^5 P/ Z$ b! b; [: |
胎牛血清10mL加到90mL的上述(1)的液体中,使胎牛血清的终浓度为10%。
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) C, U( S8 J# F8 b9 i, G
3. 首先将细胞培养瓶中的培养液弃去,加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶。
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* v, a6 A' j/ T& y, n z6 k# S. I
4. 温和地摇动细胞瓶1min,使EDTA-胰酶均匀分布在整个细胞薄层。然后用移液管吸去EDTA胰酶。
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( s% |0 j8 _( l Z- _# Y
5. 重新加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶重复上述步骤。
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2 ^4 f {& I. n) { J4 x
6. 加入1mLEDTA-胰酶使其均匀分布在整个细胞薄层,37℃孵育细胞瓶直至细胞从塑料细胞瓶的表面分离(约5~10min)。必要时可以摇动或吹打来分离细胞。然后加入1mL胎牛血清灭活残余的胰酶。
* O( c# w* Z- n. ^
5 @4 W ]! E2 e L. q- H7 k) [
7. 加9mL已经配置好的含有L-谷氨酸的D-MEM培养液,轻轻用移动移液管来吹散细胞团。
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: w9 Q* K2 O* f3 P; M* H/ e
8. 取10mL混合物加到90mL细胞生长液(细胞悬液的浓度大约为每毫升含105细胞)
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& @; h. S/ j" o1 v4 q
9. 每个T25细胞培养瓶加入6mL(6×105/mL)细胞悬液,剩余的细胞悬液可以加到T75细胞瓶用于细胞传代。通常6mL细胞悬液2~3日可生长成片(80%~90%)的单层细胞。
, E' |$ [" T, G5 a) |3 g
# I% ~+ [$ L7 S. `! {. N
10. 于37℃,5%CO2培养箱里培养细胞,每天观察细胞状态,以供进一步实验用。
$ @- q7 {' V8 h/ E! m. M
作者:
xiaoxiaodeji
时间:
2015-12-24 09:05
制备的sop根据实际操作流程规范化细化就好了,问一下,各位有没有实验室规范管理的相关文件
作者:
gyjjsw11333
时间:
2015-12-24 09:09
为什么下载不了呢
作者:
细胞海洋
时间:
2015-12-24 11:29
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gyjjsw11333
的帖子
) y( i9 x ?- w: e, W! z
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