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标题: 请教大家MEF的问题，my nightmare！！！ [打印本页]

作者: meiying3061 时间: 2011-11-22 14:13 标题: 请教大家MEF的问题，my nightmare！！！

1、大家做MEF的时候，用的都是什么培养基？那个公司的？培养基配方？& w: Y, l A; C! D5 o$ E
2、MEF都是几代可以用丝裂霉素C处理？
3、MEF传代频率（即几天可以传一代）？传代密度？
我的问题：我基本是3天传一代，一般传到P2时，细胞就只是铺展变肥，但是并不分裂，就是说数量根本不变化，到底是什么问题呢？谢谢各位同仁指导。

作者: zhusealin 时间: 2011-11-22 14:46

我们用的液体的hyclone DMEM高糖，血清也是hyclone的，传到第三代辐照或用丝裂霉素处理。1:3传代，MEF长得挺快的，我们基本上是2天传一次。你的情况有可能是传代密度低了，MEF传代密度低就长得慢了，容易老化。做原代的时候也要注意一下，胰酶不要消化过头。我们做原代的时候，都会留有一些没消化完的组织块。

作者: meiying3061 时间: 2011-11-22 15:08

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我是1:2传的代啊，用的培养基是hyclone DMEM 高糖，四季青的胎牛，P0和P1长的都还挺好的，就是到了P2之后就张不好了，我现在呕死了

作者: song58 时间: 2011-11-22 15:49

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四季青是啥？
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建议使用进口血清" H( w* O. i B p8 w. i" x# ?6 a6 }- h
不是崇洋媚外，是有时候国产的真不好用啊...尤其是做feeder养ES的时候

作者: genedu 时间: 2011-11-22 17:10

血清的问题，用GIBCO的血清，问题一并解决

作者: 郭小妹 时间: 2011-11-22 21:11

我们用的是进口GIBCO的高糖DMEM Hyclone的血清，配好液体后还要过滤，长到5代以上都没问题，1:3或1:5传，3-4天长满；丝裂霉素C处理一般用3-5代的。

作者: meiying3061 时间: 2011-12-6 13:54

回复 genedu 的帖子" k- t! \ x* A: v* P* E
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谢谢同学，我换了进口胎牛，细胞现在长的很好，非常感谢。

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