干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: 解读胚胎干细胞培养 [打印本页]

作者: zhounanhi 时间: 2012-2-23 13:59 标题: 解读胚胎干细胞培养

对于小鼠胚胎干细胞培养有个不明白的地方：干细胞培养时是铺在饲养层上的，那么在传代和冻存的时候对细胞的消化就连饲养层细胞一起消化了，那么传代和冻存的细胞里不就不只是干细胞而掺有饲养层细胞了吗？8 P- Y% O+ {# D _8 L3 @9 v
另外还有个疑问：我查文献也看到胚胎干细胞可以无饲养层培养，那么具体方法是什么，直接用明胶处理后再铺上干细胞就可以了吗？

作者: song58 时间: 2012-2-23 14:39

是的。
是的。

作者: zhounanhi 时间: 2012-2-23 15:27

那冻存的干细胞里掺了饲养层细胞会不会影响后续实验啊？& Y9 R; [) Q+ s8 L. \% q4 [( N0 v

作者: yuyan 时间: 2012-2-24 09:19

回复 zhounanhi 的帖子
) R" b$ [) T6 J9 }# x2 Z) ^5 @
feeder细胞没有增殖能力，传代过程中会逐渐死掉。

作者: song58 时间: 2012-2-24 10:09

回复 zhounanhi 的帖子
- T- O: m6 l! o- I8 \3 G
再复苏、传代的时候，这些feeder几乎都不贴了

作者: zhounanhi 时间: 2012-2-27 09:02

谢谢各位的解答！

作者: 安静的折腾 时间: 2012-3-1 11:25

小鼠的胚胎干细胞feeder-free培养，用明胶gelatin 37度包被大概40分钟，然后种上mESCs即可。
注意：mESCs feeder-free培养用的是N2B27培养基，N2B27 (200ml): Mix 100 ml DMEM/F12,100 ml Neurobasal medium, 1 ml N2 stock, 2 ml B27 supplement, 1%Glutamine, 1%NEAA, 1% Sodium pyruvate,200ul β-Mercaptoethanol,以上是基础培养基的配方。用来culture mESCs还要加2i（PD0325901+CHIR99021）+Lif

作者: 安静的折腾 时间: 2012-3-1 11:30

当然你也可以参照Astin Smith实验室的配方，参照下面的文献

作者: zhounanhi 时间: 2012-3-2 14:58

相当感谢楼上的回答，点回复没反应，不知道您能不能看到，呵呵！

作者: 细胞海洋 时间: 2012-3-3 00:46

回复 zhounanhi 的帖子

什么浏览器？最好用ie

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://stemcell8.cn./)