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标题: 如何能避免操作中的污染！ [打印本页]

作者: 帝国黑骑士 时间: 2012-8-22 10:38 标题: 如何能避免操作中的污染！

本帖最后由帝国黑骑士于 2012-8-22 10:38 编辑

在实验室操作时，有些实验步骤繁多，除了小心谨慎，还是小心谨慎，怎么样才能更好的避免污染呢！这里请大家交流一下！

作者: safflower 时间: 2012-8-22 11:28

是细胞培养的污染吗？
所有试剂沿酒精灯摆放，所有用具用前在酒精灯上过一下，保证严格的无菌操作。& N4 a+ _. p+ H( M* n3 T) a) r
学会之后，还从来没污染过，有时甚至培养基中没加双抗。

作者: shy8610 时间: 2012-8-22 12:51

严格遵守规定，谨慎小心，沉着冷静，注意分装和无菌不重复操作，至于酒精灯嘛，生物安全柜内不建议使用

作者: lazyworm 时间: 2012-8-24 08:36

我们也不提倡用酒精灯，好多东西都是一次性的，不能过火，带了培养基的移液管也不能，产生的有毒物质对细胞不利。再说即使是玻璃的耗材能过火，但是就这样简单的过一下能杀死全部的微生物吗。培养室、培养箱定期清洁消毒，操作中严格无菌，对细胞培养来说应该就没什么问题了。其他实验应该是避免东西的交叉污染，比如说吸取不同试剂时枪头要更换。有时候碰到水都能批出东西来，这就可能是污染了。就想到这些了，总之，做实验要小心谨慎才能做好做精。

作者: 吕少阳 时间: 2012-8-27 14:03

稳重，规范

作者: mayanfeng 时间: 2012-8-27 23:43

重点在于器械培养基的准备跟环境，操作对于熟练的人没什么问题

作者: 珍珠贝儿 时间: 2012-9-24 15:46

实验前大约想一下试验操作流程，每次试验完总结下不当的操作，思考更好的流程，减少手在瓶口，培养皿口过的机会。
培养基分装成小瓶使用8 i; Z; u" G+ e3 J4 t2 w3 j
移液枪一定拿稳，枪头不要碰壁。
尽量靠近超净台里面操作，不要再靠外面的地方操作。. A |; i1 ?6 f
实验前深呼吸，进入注意力集中地状态，实验时最好全神贯注，别跑神等

作者: 旅行爱 时间: 2012-10-2 21:57

学习了

作者: 旅行爱 时间: 2012-10-2 22:00

1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射30-60 分钟灭菌，以70 %ethanol 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以70 % ethanol 擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作。 c1 E" |3 l0 X. j$ A& v6 c
2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验用品用完即应移出，以利于气流之流通。实验用品以70 % ethanol 擦拭后才带入无菌操作台内。实验操作应在抬面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。 & ^+ _4 W! V/ @. w
3. 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45° 角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝上放置桌面。 4 H* i% G! R! y" R
4. 工作人员应注意自身之安全，须穿戴实验衣及手套后才进行实验。对于来自人类或是病毒感染之细胞株应特别小心操作，并选择适当等级之无菌操作台(至少Class II)。操作过程中，应避免引起aerosol 之产生，小心毒性药品，例如DMSO 及TPA 等，并避免尖锐针头之伤害等。 & p4 m3 @/ ^3 u
5. 定期检测下列项目： 5.1. CO2 钢瓶之CO2 压力 5.2. CO2 培养箱之CO2 浓度、温度、及水盘是否有污染(水盘的水用无菌水，每周更换)。 5.3. 无菌操作台内之airflow 压力，定期更换紫外线灯管及HEPA 过滤膜，预滤网(300小时/预滤网，3000 小时/HEPA)。 4 R9 H# ~# a/ \9 ~! A
6. 水槽可添加消毒剂(Zephrin 1:750)，定期更换水槽的水。

作者: 旅行爱 时间: 2012-10-2 22:06

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作者: Donnies 时间: 2012-10-23 11:07

做实验的时候本着一颗平常的心态，如果太过小心反而适得其反，知道自己哪一步是无菌的，哪一部分不需要太注意，把握好尺度，这个只是个人的实验心得，希望有帮助

作者: baicaikua 时间: 2013-11-13 15:51

其实现在已经逐渐部在使用酒精灯了。一般是在使用生物安全柜或超净台前先用紫外灭菌30分钟，在通风30分钟，个人习惯用75酒精将台面擦拭干净，穿洁净服，如无洁净服至少要穿干净白大褂并戴上无尘护袖等，操作时当收拿出操作台面后再次进入需用75酒精消毒，在试验台内的物品不可随意拿出试验台，暂时用不上的物品尽可能放置在远离双手操作区域，部可在敞口的上方操作，拆除物料外包装时尽可能远离需操作的物品，尽可能将双手远离台面，敞口物品不可直接放置在台面上，因为台面是生物安全柜里最不干净的地方，应由已架子板房，操作人员不可留长发，更不可化妆。还有好多好多细节，想不起来那么多了。

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