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标题: 成软骨诱导阿利新蓝染色 [打印本页]
作者: huajie881026    时间: 2012-10-9 09:25     标题: 成软骨诱导阿利新蓝染色

本帖最后由 huajie881026 于 2012-10-9 09:28 编辑 + r) X% I1 u7 O$ M8 E8 G
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前些日子自己试着做了成软骨诱导分化，5天左右细胞成一团，随着时间慢慢变大，诱导至满28天，细胞团直径约达2mm，团块较白，感觉上是诱导成功了。昨天石蜡包埋，然后切片、脱蜡、脱水后，阿利新蓝染色30min后，拍了照片（如下图），一些疑惑请教做过成软骨诱导的大侠：
, f; `" E5 o( F2 Y1 H! ]1、切片是不是厚了？昨天切的时候设置的是5um，但切下来的时候感觉厚了，有些地方有重叠；% v6 X9 b( e$ M& }
2、阿利新蓝染的是粘多糖，应该是在外周部分还是中间部分？
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[attach]46494[/attach]$ q: L  u6 y0 J" E; t$ D
200×
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作者: tjbone    时间: 2012-10-9 10:39

阿利新蓝染可以染软骨基质，但不知你用的是标准阿利新蓝染PH2.5还是PH4.5，PH值不同染的酸性物质不同。
1 ]1 c5 Y7 Z( q' Z* o  m软骨含有硫酸软骨素，同时在软骨基质中含有氨基聚糖，也可以用翻红O或甲苯氨蓝染色。
作者: huajie881026    时间: 2012-10-9 14:43

回复 tjbone 的帖子( c: Z* D+ g! B  q
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请教包埋前细胞团需要脱水吗？感觉没有脱水的的话，石蜡没有将细胞团很好包住导致切片不好切。
作者: tjbone    时间: 2012-10-9 15:12

本帖最后由 tjbone 于 2012-10-9 15:13 编辑
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一定要按要求先固定，再由低浓度酒精开始到高浓度脱水，二甲苯透明、浸蜡、包埋才行！！！
作者: huajie881026    时间: 2012-10-11 23:43

回复 tjbone 的帖子
, H5 R+ o9 l  y: T
) G# V  p) f2 `* d+ y* z2 M3 ]嗯  受教了。。。非常感谢！
作者: tutufei    时间: 2012-11-9 18:51

回复 huajie881026 的帖子
! X, ~! g. E- y7 d) a, s; S# ?% a# b
请问你诱导的软骨团长得快吗，这么小的软骨怎么做石蜡切片啊？我诱导的不怎么长啊，形成的圆球，直径才1mm多
作者: huajie881026    时间: 2012-11-11 10:51

回复 tutufei 的帖子. |8 P6 A* Q% ^1 A! X& c
. k$ p; w8 ~, f# M' V" ~8 P
可能细胞状态不好导致团块长得慢  I! [6 q& `1 v, w
石蜡切片我也做的不是很好，可以试试冰冻切片
作者: tutufei    时间: 2012-11-14 22:30

楼主，你这个图是染完色直接拍的是吗？还没脱水透明封片吧？有用甲苯胺蓝染过吗？
作者: 644414915    时间: 2012-12-6 16:11

细胞爬片用的是什么包被的玻片 是赖氨酸吗还是明胶啊？
作者: 细胞海洋    时间: 2012-12-7 11:01

你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样
& a/ h8 d* F% H+ N5 C5 a
) \( c+ d5 A4 F4 O否则他会看不到% i8 G1 ^3 |3 X0 G
作者: ytumuyangren    时间: 2012-12-12 00:00

请问楼主您做的软骨诱导是pellet培养方式吗？
作者: huajie881026    时间: 2012-12-12 10:36

回复 ytumuyangren 的帖子4 n% \' t% g, O5 |: [& F

' K6 g# A, S3 K3 o6 r是的
作者: ytumuyangren    时间: 2012-12-12 20:24

回复 huajie881026 的帖子" s! _9 d$ N! B6 c; Q# N
" t/ V4 W( v: f, c+ Z& B7 S# s7 _
能具体讲解一下您是怎么做的吗？我现在也做这方面的实验，但是在pellet培养三天后，形成的球状就崩解了。不知道您有没有这样的情况出现。
作者: huajie881026    时间: 2012-12-13 00:34

回复 ytumuyangren 的帖子
( M, W* m* R: `
+ C  H5 }  r5 j; L. Z; b9 g% A0 z+ U细胞状态是否良好？形成pellet所需要的细胞量是否足够？
作者: ytumuyangren    时间: 2012-12-14 23:06

回复 huajie881026 的帖子% ^9 _4 O$ V6 k, ~
* m' X9 P% q3 J9 ~% ?
细胞状态挺好的，我用的是P3代MSC，细胞量是2X105，1200rpm，5min，0.5ml体系。
作者: huajie881026    时间: 2012-12-15 00:45

回复 ytumuyangren 的帖子
  D# ~& Q3 v  W6 S
* G( F+ g; s7 h: i+ @% a- V) L" V$ s嗯 我也是这么做的  每次换液的时候要小心诱导基不要影响到pellet* r- c; ~8 F4 P- o
你要不再试试
作者: ytumuyangren    时间: 2012-12-15 22:47

回复 huajie881026 的帖子
, b+ n. g% C+ S' T6 v6 L) a4 O% N- a; F
我已经做了快一个月了，每次都是前一天刚做好的pellet，第二天pellet上部有球状物，再过两天，球状物就崩解了，在往后就看到离心管底部一直是片状物，pellet没有浮起来的迹象，我再试试吧，不过还是要谢谢你！
作者: huajie881026    时间: 2012-12-16 00:28

回复 ytumuyangren 的帖子
) Y4 F# r. h/ D# F* Q$ W' w# Y( x$ k( l- e# {  k3 f
一般pellet不会扶起来吧，形成球形后有软骨的乳白色的感觉，一般轻易不会散开，你再试试吧0 h7 c& ]! v+ k- ^: o+ r
PS：离心后三天不要去动它，三天后换液的时候基本感觉的到了
作者: ytumuyangren    时间: 2012-12-16 21:36

回复 huajie881026 的帖子, b* ?" c3 P5 T) ~
. z" y4 l% y8 @+ u
好的，谢谢你，我再试试，有问题再请教你！
作者: tutufei    时间: 2013-1-5 21:35

回复 huajie881026 的帖子
# g% ~8 Y, ~% `5 o* B! G5 E5 a
8 v4 g. [  u: f) J- P6 _8 F. A- ?请问你用的阿利辛兰如何配的？pH?
作者: 644414915    时间: 2013-1-9 02:56

回复 细胞海洋 的帖子* U& |8 m2 m1 o6 [& C# S/ ]2 \

* f" w3 B9 _5 L! o' f0 W& z/ D0 C" a谢谢哈，开始没找到
作者: 农夫山泉nn    时间: 2014-12-28 12:03

回复 tutufei 的帖子2 B: f3 @' V) h

. K; O/ ?3 z/ S2 a* c" G你好，时间有点久了不知道你还能看到这则消息不了，我软骨诱导的细胞也好小，不知道你最后怎么包埋切片的？最终染上色没有呢？
作者: winstonsee    时间: 2017-6-6 08:54

软骨求一般看不到长吧，或者变小，我诱导得到的软骨球都很小；石蜡切片不顺利的话可以试试冰冻切片
作者: 屋檐上的乌鸦    时间: 2019-3-12 10:41

学习了。



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