干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站

标题: DMEM的pH [打印本页]

作者: wangzhiqi86 时间: 2012-11-5 21:46 标题: DMEM的pH

DMEM是常用的一种培养基，但是使用过程中会发现，随着时间的放置，pH会逐渐升高，最明显的就是指示剂酚红慢慢变紫。尽管配制的时候会加入NaHCO3和HEPES这种缓冲液，但是还是没办法。不知道大侠们有什么方法可以让培养基的pH维持在7.2的时间长一点，至少开瓶用后，在4℃能保持这个pH两周以上，谢谢！！

作者: 小呵呵 时间: 2012-11-5 22:26

你可以放在二氧化碳培养箱中平衡一下。

作者: wujh1986 时间: 2012-11-6 08:10

可以自己配一些HEPES啊,看到培养基偏碱时稍微滴一些进去

作者: ljs 时间: 2012-11-6 10:10

我们实验室配好的DMEM，分装，标注名称、配制日期、操作者，开封日期，然后密闭4℃保存。每开一瓶加一瓶的所需成分，如血清，双抗，谷氨酰胺，理由是这些添加的因子有半衰期。在包装瓶上详细标注加入的成分，浓度，操作者，在给细胞换液，补液前通常会在培养箱热敷培养基。理由是1.避免冷应激（具体原理我不是很清楚）。2.培养基在不同的温度下PH值可能变化。个人经验，仅供参考！

作者: wangzhiqi86 时间: 2012-11-6 13:47

回复小呵呵的帖子

长时间放置的话，不能一直在培养箱吧，不然像Gln这种降解的非常快

作者: wangzhiqi86 时间: 2012-11-6 13:48

回复 wujh1986 的帖子
+ q8 M8 G2 u* A: Q
之前试过，加进去当时确实有效果，酚红变成橘红色，甚至都变黄了。但是没过两天，培养基pH又上去了。如果一直加的话，HEPES浓度太高，对细胞肯定有毒性。

作者: wangzhiqi86 时间: 2012-11-6 13:50

回复 ljs 的帖子
, z3 O# A! {0 H5 l( W0 j
但是一旦开封，就往往意味着培养基的pH会慢慢升高，因为NaHCO3分解后，CO2就跑了，不知道你们实验室有什么解决方法没？谢谢

作者: ljs 时间: 2012-11-6 14:33

回复 wangzhiqi86 的帖子7 z" i5 n- d) k0 m4 C% n

楼主拘泥于细节，忽略了缓冲剂的离子的作用，无论方法如何，看结果。

作者: wujh1986 时间: 2012-11-6 16:16

回复 wangzhiqi86 的帖子5 r! ?1 {1 ?: v) j, _
$ T/ B9 T6 z) d& p8 b/ Z
那你如果非要这么严谨的话,每次你买回来的培养基可以自己先分装成小瓶,培养基用的很快的,一瓶培养基不可能那么快就变碱,而且如果要加Hepes,基本上中间加一次,那瓶也就该用完了. 如果真的你的培养基频繁的偏碱,那你培养基用的也不适当,给细胞换液或者传代,培养基才暴露那么短时间,不可能那么频繁的就偏碱了.

作者: ditiger 时间: 2012-11-6 19:56

两周应该没啥问题，除非LZ开盖时间太长了，滤点HEPES，看到变碱时，加一点。用完封口膜封上。

作者: lql2006wh 时间: 2012-11-7 08:30

我们原来用dmem 加3g/l HEPES,很好啊，开用之后也不会像lz说的2w就碱，用挺长时间的。

作者: 突击兵之小土豆 时间: 2012-11-7 14:59

回复 ljs 的帖子& y1 c$ ]2 w3 I9 _

顶说的没错

作者: NK细胞 时间: 2012-11-7 22:00

突然又想起一个问题，培养液变紫后对细胞有影响没？影响有多大？6 ?0 g, c* U- r6 |$ V
/ @' l! q& o: {( s$ t( F

作者: 细胞海洋 时间: 2012-11-8 10:07

回复 NK细胞的帖子! i5 f+ z. |4 q2 H7 H

你回复谁就点击对方回复帖子中的回复按钮然后输入内容像我这样
, h. }+ J9 b# R1 z
否则他会看不到

作者: lql2006wh 时间: 2012-11-8 12:46

回复 NK细胞的帖子7 T5 [4 g, }$ ^% F# M8 v

现在养MSC，碱的培养基不用了，不知道会不会有影响。5 V) R0 k7 \+ ]
我们原来养Vero、MDCK之类的，很碱的也用了，感觉也没什么不同。

欢迎光临干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站 (http://stemcell8.cn./)