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标题: 用1.073的percoll分离兔子骨髓MSC，求助配置1.073g/ml的GE公司percoll的具体方法？ [打印本页]

作者: ytumuyangren 时间: 2012-12-25 23:18 标题: 用1.073的percoll分离兔子骨髓MSC，求助配置1.073g/ml的GE公司percoll的具体方法？

因全骨髓培养获取兔子骨髓MSC存在一定的弊端，因此在实验过程中想采用密度梯度离心的方式来分离MSC，看到有关兔子MSC分离所采用的percoll的密度梯度是1.073g/ml，查阅了一些配制1.073g/mlde percoll的资料，有不同的解释。( b( p+ N0 F4 W; K `
方法一：
1.先用9份Percoll与1份8.5％ NaCl或1.5M PBS混合达到生理性渗透压；% A- q9 q; ~+ Z& T( o+ v- [( a4 s
2.然后用生理溶液(0.85％ NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度：56体积percoll：44体积NaCL或PBS。
方法二：1 P4 K, v3 B7 B9 M$ Y
9ml percoll原液+1ml8.5%的NaCl=工作液 9 @2 n+ ^; y; s0 T( u# `3 f
10ml工作液+7.9ml 生理盐水=1.073的percoll
特此请教各位大侠，帮忙解决一下，不胜感激。

作者: pengxuleo 时间: 2012-12-26 09:49

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你说的挺清楚的，按照你写的配置就可以了，两个方法都可行。一般情况下都是用10XPBS配成90%的母液，然后在做梯度离心前，用1xPBS或者生理盐水或者基础培养基配到你所需要的密度，在室温下进行梯度离心。

作者: ytumuyangren 时间: 2012-12-26 19:18

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) E! N5 L, O1 G
嗯，谢谢pengxuleo的指点，今天试了一把，看到了传说中的雨雾层，分离后洗了一遍离心接种到T25的培养瓶中，明天看看效果，呵呵，希望能够成功。另外，我今天下了一份GE公司的percoll配制说明，讲解的还比较详细，里面有具体的公式。改天传上来给大家分享一下。

作者: pengxuleo 时间: 2012-12-27 08:30

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3 T( ^0 ]5 Q+ M; e: J5 `
呵呵，祝你成功

作者: 644414915 时间: 2013-1-8 13:07

我们没分离，也养出来了，长得贼快不到两天就要传代

作者: 644414915 时间: 2013-1-8 13:08

但是现在让小鼠间充质干细胞把我给难道了，谁要是能养出来，我真服了

作者: ytumuyangren 时间: 2013-1-9 14:04

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那你们养出来的细胞有没有鉴定？

作者: ytumuyangren 时间: 2013-1-9 14:07

最近一直忙的做实验，没有及时更新实验的最新进展，元旦前后又做了几次，都能分出单核细胞，但是分出的细胞长的太慢，呵呵，还没有达到消化传代的要求，再养养，等细胞传到p3以后再做做鉴定。

作者: 644414915 时间: 2013-1-9 23:27

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* d0 a' ?6 j0 g0 U, d' ?. n* t
鉴定了，因为鉴定有神经方面mark表达，然后一个老师看了后把我细胞扔掉了

；后来转做小鼠了。

作者: 644414915 时间: 2013-1-9 23:30

本帖最后由细胞海洋于 2013-7-22 11:50 编辑 $ b% Q! G% S& n' |" O& w
* A; x: m. u( Y
回复 ytumuyangren 的帖子. w% U3 F Q3 ?$ Y. Q
- J+ \' A$ f+ M
关键这**吧实验简单结果居为己有，因为在人家地盘做实验所以只能低三下四的，不了了之了。

作者: luoziwei 时间: 2013-7-19 09:06

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兔子MSC表达哪些marker？

作者: 644414915 时间: 2013-8-15 07:28

和其他物种一样目前没有特异性的

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