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标题: h1和h9的培养区别 [打印本页]
作者: wangxiang    时间: 2015-1-31 12:31     标题: h1和h9的培养区别

不知道大家在养什么hESC,我手里有H1和H9，但是感觉H1没有H9好样，而且这两个的最佳消化时间也不相同，不知道有没有小伙伴是养这两种细胞的，传代或是消化的时候有什么心得么？我是用EDTA消化的。
作者: hyde    时间: 2015-1-31 15:18

H1确实会容易分化一些，很多文献都使用来做分化实验，注意及时去除分化的细胞。我使用4型胶原酶消化（feeder）一个小时左右，看酶的新鲜程度。中性蛋白酶（feeder free），半个小时左右。
作者: wangxiang    时间: 2015-1-31 17:28

回复 hyde 的帖子* F, @/ F; K2 Z

/ g: ]% i8 `5 s恩。我们是feeder-free培养，用EDTA消化3分钟就可以了，感觉H1的克隆总是没有H9长的好，分化的话还是比较少见，就是传代后的H1总感觉形态很差。
作者: 缥飘实验员    时间: 2015-3-11 11:55

H1,难养啊，我们是feeder-free培养，用的 protocol 是 stem cell 的mTeSR1 培养基及培养手册，用dispase消化6分钟就可以了，感觉H1的克隆总是不圆滑，分化的话还是比较少见，你们做鉴定没有，我这边做了 sox2 oct4  nanog ssea4 tra-1-60  ，现在 nanog 一直是弱表达，求分享培养经验
作者: wangxiang    时间: 2015-3-11 17:14

回复 缥飘实验员 的帖子" k( s) s4 z) |* D
, E+ F" U% p6 e* ~5 v7 M  z0 W
H1确实比H9难养我觉得，我们用的是E8体系来培养，细胞系的畸胎瘤、核型、染色都是没有问题的，过年之后再复苏也没什么大问题，估计还是细胞系的问题吧，nanog我们1:100稀释没有问题染色，你们用mTeSR1在培养上应该扩增更快吧，毕竟有BSA。
作者: 缥飘实验员    时间: 2015-3-13 10:24

本帖最后由 细胞海洋 于 2015-3-16 09:52 编辑 * R5 }! N: l2 _$ T/ N; x
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7 L+ {# u8 v3 \+ z
5 u4 A4 O$ v0 X现在只做了这几个 marker 的鉴定，都有表达，核型没有做，畸胎瘤在准备，这个细胞以前用单细胞 accutase 来做老分化，现在改用 dispase 克隆团培养方法，基本上没有分化，但是克隆团的边缘不光滑，D2-D3毛刺边缘严重，D4-D5（一般四到五天传代）倒是能缩回去，那种毛刺边缘免疫荧光鉴定过，不是分化，估计就是一个扩增的特殊形态。现在很纠结这个形态，不是的是不是细胞系的问题，或者以前冻存的就有问题。图传不了，你能不能把你培养的 H1图片传二张给我。
作者: wangxiang    时间: 2015-3-17 09:13

回复 缥飘实验员 的帖子! q/ A% w' p3 X. ?9 G* \8 |
8 Q% P# k. i2 r3 o" Q& [5 t7 u  a/ z
不知道你们其他细胞系怎么样，我们养iPS情况就很好，细胞系只要鉴定没问题，多传几代调整状态就没问题了应该，刚传或刚复苏估计都不好形态，养几天就好了，我们是0.5mMEDTA传代，复苏用的商品。
作者: 天龙八部    时间: 2015-9-22 10:58

回复 hyde 的帖子0 k4 T! i1 X/ x4 \9 h' M
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你好，请问你是怎么么去除分化的细胞的？
作者: 细胞海洋    时间: 2015-9-22 12:07

回复 天龙八部 的帖子" Z- j' E- [! u5 h. t
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建议你发新帖提问
作者: hyde    时间: 2015-9-23 15:23

回复 天龙八部 的帖子: i5 S; {+ J0 F% T) Q- s- e

, a0 W* V9 ]  ~' c7 Q+ C) L1 z在显微镜下用marker笔将细胞划出来，用枪头戳掉
作者: 天龙八部    时间: 2015-12-7 17:13

回复 缥飘实验员 的帖子
% }( H2 h5 U2 K
$ G3 H/ D% C8 b9 r  |5 H% q' C  r3 Q3 r你好，请问你是用什么方法鉴定的，荧光定量PCR吗？
作者: 天龙八部    时间: 2015-12-7 17:15

回复 hyde 的帖子+ u- H: c0 A5 ]$ u* ~) s' \

1 Y5 c% a- t3 i) [  a谢谢啦！
作者: 康小纬    时间: 2015-12-29 09:53

回复 缥飘实验员 的帖子
" L. X7 g4 a% T% t7 u/ ?; R% D' o. i; `  A% z6 Y; i7 T9 c
你好，我现在养的hES细胞也是nanog表达比较弱，而其他的几个表达还可以，同样也是用的 stem cell 的mTeSR1 培养基，你的后来又所改观了吗
作者: 细胞海洋    时间: 2015-12-29 11:44

回复 康小纬 的帖子- X' r* ], O) @5 ?  L

3 ^- P7 }) L- l! k% m: L建议你发新帖提问
作者: 缥飘实验员    时间: 2016-1-10 21:40

回复 天龙八部 的帖子5 O2 V. Y$ v+ s. X9 Q8 _
) k' B9 {: C7 z& q
就是一般的免疫荧光试验，这个表达的还是很多，这几个基因的PCR也做了， PCR 结果记得是99%。
作者: 缥飘实验员    时间: 2016-1-10 21:41

回复 天龙八部 的帖子
5 {3 z  N" R" p* U9 x% A' A% X- ?" G9 n* X$ a' ~; \# _5 b
更多的估计是细胞本身的状态，Atlas of Human Pluripotent Stem Cells in Culture，这本书可以看看
作者: 缥飘实验员    时间: 2016-1-10 21:51

回复 康小纬 的帖子
0 p& n( n3 q9 x0 O9 v, H
5 c5 V" E0 D, L7 g) u+ U; l' X更多的估计是细胞本身的状态，Atlas of Human Pluripotent Stem Cells in Culture，这本书可以看看。
作者: 缥飘实验员    时间: 2016-1-10 21:53

回复 康小纬 的帖子
* ~" N$ W. b5 y/ S' O# ]9 Z( |7 t# P$ [5 j
[attach]74743[/attach]
作者: nichifanlema2    时间: 2016-1-10 22:40

回复 缥飘实验员 的帖子
5 ?5 j0 i) w0 u$ `; x2 F" s
. L/ S5 d/ W% r* i5 V1 P无feeder培养的ES，刚传代或者复苏的前几天，克隆多有毛刺边缘，可能跟培养条件有关，但是随着克隆的变大，边缘的毛刺逐渐消失。用条件培养基这种现象会好一些。
作者: 缥飘实验员    时间: 2016-1-11 15:59

回复 nichifanlema2 的帖子
1 O3 J4 U# T# ~% \5 N
1 L; w: ]/ P3 F, ]) @0 |& u7 C是的，但是总的来说还是没有在 feeder 上圆，边缘毛刺现象一直都有，难养
作者: 缥飘实验员    时间: 2016-1-11 16:26

回复 nichifanlema2 的帖子
2 z( F2 [; t/ `3 I/ Q4 l2 t9 b1 x  j/ `% a7 s& v7 Z; ~; O" P3 A( y5 x
帮我看看这几张图片，O(∩_∩)O谢谢[attach]74754[/attach][attach]74753[/attach][attach]74752[/attach][attach]74751[/attach][attach]74750[/attach]
作者: nichifanlema2    时间: 2016-1-12 09:41

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) x# i+ ^6 a4 ]# r  D3 }5 w; c1 \) ]3 @4 s; q
状态挺好的，放心好了
作者: nichifanlema2    时间: 2016-1-12 09:50

回复 缥飘实验员 的帖子
5 r2 g) i) v; B: [2 b  n
5 X% ^9 A, Q5 V  f2 Z- {& k确实是这样的，如果密度小一些，长的时间长一些，会发现克隆比较圆，比较扁平。
作者: 缥飘实验员    时间: 2016-1-12 14:43

回复 nichifanlema2 的帖子# u  x& S) V1 u5 Q1 k
! U) `. ~3 Q7 n8 C# i* }
谢谢，但是我们养的细胞几乎没有出现上面的图中那样，我定义为为金毛狮王样，当出现后一只养着状态没有改变，做了多能性和干性的鉴定，也都表达，但是看着也像上皮样的细胞，你能把你养的H1细胞的图片发我几张做个参考么，谢谢。
作者: liu23huan    时间: 2016-4-10 21:30

回复 wangxiang 的帖子. l' T- P. _; y9 a9 N# W% S" z! w! u

2 Z' |* Y: R; I$ `您好，看到您的帖子，我想请问下你们的hESC细胞株H9是从那里购买或获得的呢？我在做iPSCs鉴定，需要这个，谢谢您
作者: wangxiang    时间: 2016-7-14 09:13

回复 天龙八部 的帖子
$ ]9 n" G5 A  h: @4 ]+ M8 z- t! h( s. N/ I! N  F
E8体系的培养基有筛选细胞的功能吧，除干细胞以外的细胞不能生长，你的细胞要是分化有40%以上的建议就扔了吧，很难救感觉。如果是珍贵细胞，就把分化的部分刮掉，用针头等，但是应该转好的几率不大。
作者: WangYH    时间: 2017-1-8 17:18

本帖最后由 细胞海洋 于 2017-5-27 20:59 编辑
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) v) B% S8 `4 a您好楼主，我是小研究生一枚，目前仅有的一株Hesc （h9）细胞发生了难以挽回的霉菌污染，再次购买周期太长了，可否像您讨要一株，目前还不敢告诉老板[em:9:][em:9:][em:9:]，如果可以的话请联系一下我，万分感激，谢谢楼主~
作者: 吃呆猫    时间: 2017-5-17 15:49

回复 缥飘实验员 的帖子3 V3 k1 _2 U. f6 |
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你好，请教下，我养h9到D3，D4天会飘起来，是怎么回事，用的stem cell的E8，matrigel 1:30铺板，传代加Y27634。用EDTA消化，但每次传代细胞特别难刮下来，死的还特别多，而且到了D3，D4还会飘起来，是怎么回事？



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