Western Blot 蛋白封闭可不可以过夜

yangjie0329

今天做的Western Blot 由于时间原因想封闭过夜，不知道可不可以，会影响实验结果吗，还是最好封闭两小时，然后封一抗，封一抗前还用洗膜液洗吗，有谁知道，请指教，谢谢。

dqm185

回复 yangjie0329 的帖子& l/ ~" _* N, |# l- R, c

; p+ k6 J, M# Q( A. d4 [2 a我测的蛋白有42KB, 60kb两种。我封闭在3%milk，室温1小时到4度两天都可以，实验趋势一致。- I" W. F4 l0 o3 v0 ]+ G) I. w
至于封一抗前用不用洗，那就看你一抗用的溶液是否跟封闭的溶液一样。即使不一样，如封闭用3%milk，一抗用5%BSA, 其实用TBS-T冲一遍就够，不用洗几分钟的。

xuyq706

4度过夜封闭没有问题啊，一抗孵育洗不洗都没什么问题，我们实验室都做过没影响。

zhanglei1414

10%BSA+5%胎牛血清，4度扔一晚上，没事

王乾

4度封闭过夜是没有任何问题的，我们实验室经常这么干。

龙之吻

可以放4度冰箱过夜与37度俩小时效果一样

wxyWXY

我都是用脱脂奶粉稀释一抗  直接在4度过夜 没有单独的封闭过程 没问题

pingzongyunlan

可以试一下把封闭液浓度降低，然后四度过夜，晚上晚走会，早上早来会，不要时间过长应该就可以，有一次我也是时间问题，用5%的封闭液封闭了五六个小时，效果还是可以的~

艾心痕

可以四度过夜，一抗孵育前不用洗膜，我的一抗就是用封闭液稀释的。

呆呆鱼

封闭放心放到4度过夜吧，没事的，我经常这么干，一抗4度过夜也可以，这两个阶段都能放很长时间的。