Western Blot 蛋白封闭可不可以过夜

yangjie0329

今天做的Western Blot 由于时间原因想封闭过夜，不知道可不可以，会影响实验结果吗，还是最好封闭两小时，然后封一抗，封一抗前还用洗膜液洗吗，有谁知道，请指教，谢谢。

张也行

那你不如再往下做一步，一抗可以4度过夜( E' P& B% l  I5 h% m# @

jiays

一般多抗，杂带多，都选择封闭4°过夜。如果是时间来不及，4°放置1-2天都没有问题，这一原则可以用在1抗杂交，二抗杂交，关键是4°。

yangjie0329

回复 张也行 的帖子, T# K3 b  W9 B* Q

9 |) R  n& D+ d0 I那样我得做到凌晨一点多了

yangjie0329

回复 jiays 的帖子" ]; B) v) S( N- G' e* o

# u" B, t$ U' W! _( N( f& Y2 M那要是单克隆抗体呢

runsong

如果使用脱脂奶粉的话最好不要过夜，会在膜上沉淀上渣子。
) {% G: K/ U  t. V4 I7 Q我好像在转膜后在tbst里放4度过过夜
; N) M. ?) D, [6 @5 A不过一年多了，记不起来了

jiays

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" }1 O. Q& V( @2 o* Y( B" E4 c; O1 C6 ^0 [5 {* f) c
单克隆抗体也行，你放到四度睡觉吧，没关系

henson

回复 runsong 的帖子6 V$ P. F+ J4 p) [& d2 |( Z
  P; E8 {4 @* i$ z1 Y: h2 ^, g
我以前也遇到这种情况,不过可以多倒一些封闭液,然后用保鲜膜密封.

Pseudomonas

我用BSA封闭液，经常在4度过夜。如果不放心可以放在摇床上慢慢摇。

dc1055

对于大分子量的抗体来说，封闭过夜是很正常的。
1 R$ ]0 _3 c- T9 R对于小分子量的抗体来说，最好不要。