全骨髓培养MSC的注意事项

ytumuyangren

我现在培养的是人的骨髓MSC,全骨髓培养法，现在已经种到培养瓶中，只是在显微镜下看到的是一片红，文献中提到在细胞种到培养瓶两天后晃晃瓶子，让未贴壁的MSC进一步贴壁，还有文献介绍，可以将培养3天后的培养液换到另外一个培养瓶中，给原本的培养瓶加入新的培养液，这样保证未贴壁的培养液继续贴壁，我的问题是，这样培养细胞后，MSC是否能够长满培养瓶，希望各位高手能够给予指点，谢谢了！

mason658616

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谢谢！我今天传了，是等细胞回缩后就倒掉胰酶，加培养基吹打后放到新瓶子里了，养养看，呵呵

pink1198

回复 mason658616 的帖子2 Y1 a  v  K' n  \

2 }/ L9 |" w/ B2 x个人做法认为，原来的瓶子很干净，消化前细胞的杂质不多的，可以继续传代用。觉得较脏的话就换新的培养瓶,T-25的培养瓶，PBS洗涤两次后，加入0.7-1ml胰酶含EDTA，消化2分钟左右（以镜下观察，细胞大多脱落为宜）后加入2倍胰酶量的完全培养基终止消化，冲洗后转移入离心管离心，去掉上清，加入培养基接种于培养瓶内，第三天换液。

mason658616

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1:1就是消化下来然后再放到另一个瓶子里？胰酶也需要弃掉的吧？

pink1198

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$ d) C/ U2 \0 s$ D+ X# V我自己的体会是，形成了两三个很大很密的或者5-6个细胞集落，集落间没有细胞，大概11-14天左右，可以1:1传代了，如果等某个集落铺满的话再传代，那样要等很久，而且高密集的细胞容易老化或者分话，所以传代了就分布均匀，利于细胞的活力维持。

mason658616

回复 pink1198 的帖子0 w4 w2 w& J4 n4 [, w- ~3 n

7 q9 j8 l4 G/ U4 z- Q我养全骨髓是抽的人的髂后上嵴的骨髓，用PBS稀释了一下，加培养基放到T-25瓶里培养，24小时后去掉血膜，可以看到大量贴壁细胞，当然也有很多漂浮的，漂着的应该是不要的。3天就有稀疏的细胞爬出，换液2-3次就比较干净了，可以看到5-6个密集的细胞集落。我也有个问题，需要等所有集落会合长满全瓶再传代吗？集落的细胞已经很密了，但是集落间没有细胞。

athena1988620

多洗几次就好了，我的人全骨髓一般是24小时洗一次，48小时完全把红细胞洗干净，然后就慢慢有梭形细胞贴壁生长了

athena1988620

多洗几次就好了，我的人全骨髓一般是24小时洗一次，48小时完全把红细胞洗干净，然后就慢慢有梭形细胞贴壁生长了

肉丁

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# V$ X2 x9 `: `- ~那个，这个纯属是个人的经验啊，人全骨髓MSC培养时，不要着急，一般4天都不要处理它，4天后轻摇换液，一定要清洗几次，不然杂质会比较多，影响细胞的生长，可能这时候还没有看到有梭状细胞的存在，但不要着急，换二次液后，就会在培养瓶的边缘有零星的梭状细胞存在了，尤其是靠近培养瓶口处，一个原因是靠近瓶口透气较好，还有一个原因是根据细胞的生长特性决定的，个人观点，仅供参考，呵呵。哦，对了，是可以长满的。

ytumuyangren

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% Z4 k# ^* J1 @" u. J是的，通过这种方法可以帮助病人多一次换其关节的机会。