hiPS传代时的消化问题

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今天传代用胶原酶消化30min后 feeder全晃下来了，iPS继续消化了20min也下不来
0 v: v3 J" @# |  Z. s, k酶是刚配的sigma粉末 1mg/ml
' [, X. G# }( ?2 l1 S怎么回事，大家遇到过吗

Jonathan

问题很多啊。1 feeder 太密，2 克隆形态太差 3 消化时间过度 4消化后是用枪头或者啥的刮下来

fwj81

饲养层好像密了点，我们用0.05的胰酶消化5分左右就好了，且传代生长很好呀，检查下是不是哪个环节出问题了

jcb

为啥不在胶上养。便宜很多。 传代，dispase 比较好。消化六七分钟，洗三遍然后用玻璃移液管切成小片。
, n# d1 j4 q$ S* n* R: w0 D9 d" C

第一心音

建议直接挂下来

gexiaoyatou

回复 BNJN 的帖子" D0 v) U3 k+ |- W. T; @
9 B( X2 v' y# `; b, H
是哪个公司的dispace，可以推荐下吗？大体消化到什么程度呀？

也行天下

       feeder太密了！iPS克隆中间的细胞好像已经有分化了吧，这可能也是iPS克隆消化不下来并且细胞较散的原因吧。
+ ]9 T1 U( t" a    我们用胶原酶消化一般40-50分钟至iPS克隆明显卷边，即使克隆完全消化下来了细胞也不会像图中的那样散。
, K: S+ S2 Y# e& {5 c. w8 B: t

fguw

比较标准的是，DMEM/F12（1：1）! t0 A3 ?" {) a
因为基础培养基就是这个，
* x$ _5 Y4 ?2 D# o4 u我们实验室做过实验，发现这个最好，

573639471

回复 fguw 的帖子  N* n! x1 e+ n" \. Y

; n: U0 k- N# G0 O配的有什么问题？除了不应该用PBS还有吗

白巧克力

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( l# w/ w9 V; L. E, @) E4 u
. E- f+ m" X# |3 z! I: M7 d. QGibco的，具体与楼上BNJN相同。