精原干细胞建系交流--发现培养液变黄，细胞逐渐死亡

20111109

问：各位大侠们，最近遇到问题，我现在做小鼠精原干细胞体外建系，发现到F3代培养液变黄，细胞不见生长，再传代的细胞状态很差，贴壁性不好，逐渐就像枯掉一样，换液就几乎没有sscL .
( z) O; H/ m5 @. ~* D; p- i$ K7 W% t1 n+ k7 u1 ^0 t
请问这里有好心的亲们能帮我分析一下原因么，万分感谢呢。

奋斗的时光

有没有可能是分化了，或者培养基中的某些养分刺激了精原干细胞的凋亡？
/ ?- o- I/ Y# V4 X$ M9 N* L3 k% D* `精原干细胞的培养基成分是个很重要的因素。: L/ N) z- C- E
但是如果照你所说，贴壁都不怎么好，吸出来都不剩啥了的话，这个细胞状态就太差了。6 s4 F0 H7 y" M
也建议重新分离把。

saifast00

回复 20111109 的帖子9 H. f/ W  J7 k+ `" h8 E
0 _9 `' {- B. [4 H
细菌真菌污染都会变浑浊变黄，还有变黄主要是因为培养基PH变酸，看看你的孵育箱CO2是不是偏高？

20111109

回复 saifast00 的帖子
* K. g( A% ]; P1 c3 Q/ U( u; M  @0 ^' W5 o% R
是么？ 那请问培养液隔夜变黄有哪些原因呢？我都快崩溃了 ，找不到原因，细胞就一直死下去了。

w343989328

回复 saifast00 的帖子( y  o0 H, D0 f5 n5 t' H" W# N

" O( N& ~  R8 Z; p' B# E# }( ?# H2 [会变黄变得很快啊，因为营养被抢夺啊

saifast00

回复 w343989328 的帖子- N! I* T# e' P3 r" x
: j5 e6 |% F" y* m# @" T
支原体感染培养基是不会有明显改变的吧？？

w343989328

回复 20111109 的帖子( x$ o4 Z2 \* l  I
. A$ Z# n% d( z# C4 v0 q: }! E
嗯 做个支原体检测吧  就个PCR而已

20111109

回复 w343989328 的帖子- f* g; g% y; \- u" O9 G, J

1 N7 G0 A: {- |我的细胞最先出现的是不分裂，细胞散在存在，几天以后有部分细胞会飘起来，在培养空的中间液体中悬浮着很多细小的细胞，换液之后，细胞就越来越少，最后细胞就像崩解了一样，我也不清楚是不是支原体，培养液是会变黄的。

w343989328

支原体主要两个来源，一个是血清，一个是动物本身，即使是SPF级也很难避免。我们之前分离耳朵的纤维细胞一直出现支原体，SSCs还好，所以我猜，你可能在分离细胞过程中被支原体污染了。支原体一般不会直接导致细胞死亡，只是和细胞争夺养分，导致细胞状态逐渐变差，是一个比较慢性的过程。而且，细胞培养基迅速变黄，是支原体污染一个特征。

20111109

回复 w343989328 的帖子
  |; m! T9 f3 G/ s: h6 d" M, |. J  w
  ^( Z0 N! r: n: h, e. O我不理解 你的意思是支原体来源于小鼠 可是我的细胞从建系到F3代时间有20多天了 这段时间支原体是一直在潜伏状态么？