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标题: 细胞制备操作SOP [打印本页]

作者: guanjun1314 时间: 2015-12-17 08:53 标题: 细胞制备操作SOP

哪位大神有“细胞制备操作SOP”相关的资料提供参考不？叩谢！

作者: plum 时间: 2015-12-17 10:15

本帖最后由细胞海洋于 2015-12-17 12:27 编辑 . v1 i# x. ?# E" V% W
5 l1 q+ O/ A) k+ U5 C ^4 E2 x
这里有个CIK的，你参考一下。取之于民用之于民

作者: yooung 时间: 2015-12-17 10:54

本帖最后由细胞海洋于 2015-12-17 12:27 编辑

回复 guanjun1314 的帖子

细胞制备操作SOP？SOP要求非常细，不同的细胞的制备SOP肯定不一样，所以你应该说明是什么细胞的制备操作SOP。3 A' Q2 |# o% P( ?
另附一份脐带间充质细胞的说明书，其中有部分可以用作SOP的内容。9 [& R/ q+ J! t. m5 V6 H

作者: guanjun1314 时间: 2015-12-18 09:48

回复 yooung 的帖子
3 y( [6 T; E2 E5 U& R
感谢提醒，我要的主要是针对CIK的，流程我们有，但SOP我真没有

作者: yooung 时间: 2015-12-18 11:18

回复 guanjun1314 的帖子" L! k, _+ |9 g' }% ~+ }

以前也写过一些SOP，我觉得SOP就是把流程细节化，把实际操作文字化，再加些注意事项，套上SOP通用的格式，就可以了。

作者: guanjun1314 时间: 2015-12-18 15:01

回复 yooung 的帖子) r7 a! n+ h( k+ U
% b2 E/ T1 T; c
嗯，建议得好，采纳

作者: guanjun1314 时间: 2015-12-21 08:49

回复 plum 的帖子4 I8 A% x1 @% z
9 _7 }& u% ^" U9 D
非常感谢

作者: 海南小石 时间: 2015-12-21 16:29

本帖最后由细胞海洋于 2015-12-22 12:26 编辑 # |: y7 L* h; V3 i& B3 Q- ~
/ }0 |5 I, X: t4 l
有一个相关的，希望对你有帮助
一、目的
( X  O; r5 Y6 Y4 v3 n
MDCK细胞培养是分离流感病毒及相关研究实验的基本技术。疾控中心的所有技术人员，必须按照本文件相关的操作规程进行操作。( z8 A9 z2 x  i. c1 W7 B' s
" }4 p; ?/ D1 Q1 n0 S
二、适用范围

适用于疾控中心所有技术人员。; }/ |/ O! }- |: ]

三、程序

（一）生物安全要求, }( b/ G7 v, b- Y

实验室生物安全级别：BSL-1' ?. I) P# R+ _: {
8 T0 N; r, o' t" O7 y4 R' `
所有操作必须在BSL-1实验室的生物安全柜里进行。
: u; N3 K4 ~* `5 y, g4 W' x( e
（二）材料& r; ~6 X" h2 |7 E* g. X5 D
: ~$ j6 V4 J/ A' d
1. 生长成片的MDCK细胞& P$ ^7 ^/ a. A7 K5 j
4 l* Q7 _( ~, C: C/ n( w
2. 无菌的T25细胞培养瓶
, y5 e, |( U' E0 b. k: x* Y
3. D-MEM培养液（含有L-谷氨酰胺）0 {& V& P$ ]8 D; J+ v1 c$ s
& @$ {' ]7 c9 a% F9 {4 C4 p
4. 青、链霉素母液（10000 U/mL青霉素G；10000µg/mL硫酸链霉素），分装后保存于-20℃
2 b) s6 r7 n# m5 N& p9 t. N& P7 E
5. HEPES缓冲液，1M母液
# `# y. G; U' I2 s( W+ N
6. 胎牛血清6 |6 k- v8 k0 E$ Y: e

7. EDTA-胰酶（0.05%胰酶，0.53mM EDTA-4Na），分装后保存于-20℃+ d" y# h% W) X9 U$ P

8. 7.5%牛血清白蛋白组分V
! G; }+ ~5 B3 h3 y
9. 1mL、10mL无菌移液管

10. 70％～75％的酒精

注意事项：经常检查试剂使用的有效期。
, J2 _& F+ e! r" K4 i5 H; M
（三）实验步骤* ?' |! u% }1 k; u, H- K0 r
) R9 c& g( n( q5 r* I2 |6 o" d. f
这里以T75细胞瓶的单层细胞培养为例，叙述MDCK细胞的培养程序。如果细胞瓶的规格有变，MDCK细胞悬液的量必须做相应的调整。

1. D-MEM培养液的准备) z% L9 @# b+ T: D3 `! S  H1 I. B
) g6 O# C# h& r: ^8 V& g
500mL D-MEM液中加入：5 W2 K& R& ~( F( d8 a! d
5 N: m% z- ]# k, X/ ~
青、链霉素母液5mL（终浓度达：100U/mL青霉素；100µg/mL链霉素），

HEPES缓冲液12.5mL（终浓度：25mM）。$ g( h* i5 A, q8 D! j' b9 c
# r5 n( a$ Y1 S
7.5%牛血清白蛋白组分Ⅴ 12.5mL , F" r% e* x3 p" S

2. 细胞生长液的准备6 K- I0 r+ V5 a& G$ q1 _; t

胎牛血清10mL加到90mL的上述（1）的液体中，使胎牛血清的终浓度为10%。! {' d- {! Y. N$ v7 i
) C, U( S8 J# F8 b9 i, G
3. 首先将细胞培养瓶中的培养液弃去，加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶。2 B, o1 Q. h- n0 c% l
* v, a6 A' j/ T& y, n  z6 k# S. I
4. 温和地摇动细胞瓶1min，使EDTA-胰酶均匀分布在整个细胞薄层。然后用移液管吸去EDTA胰酶。

5. 重新加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶重复上述步骤。
2 ^4 f  {& I. n) {  J4 x
6. 加入1mLEDTA-胰酶使其均匀分布在整个细胞薄层，37℃孵育细胞瓶直至细胞从塑料细胞瓶的表面分离（约5～10min）。必要时可以摇动或吹打来分离细胞。然后加入1mL胎牛血清灭活残余的胰酶。
5 @4 W  ]! E2 e  L. q- H7 k) [
7. 加9mL已经配置好的含有L-谷氨酸的D-MEM培养液，轻轻用移动移液管来吹散细胞团。
: w9 Q* K2 O* f3 P; M* H/ e
8. 取10mL混合物加到90mL细胞生长液（细胞悬液的浓度大约为每毫升含105细胞）
& @; h. S/ j" o1 v4 q
9. 每个T25细胞培养瓶加入6mL（6×105/mL）细胞悬液，剩余的细胞悬液可以加到T75细胞瓶用于细胞传代。通常6mL细胞悬液2～3日可生长成片（80％～90％）的单层细胞。, E' |$ [" T, G5 a) |3 g

10. 于37℃，5%CO2培养箱里培养细胞，每天观察细胞状态，以供进一步实验用。$ @- q7 {' V8 h/ E! m. M

作者: xiaoxiaodeji 时间: 2015-12-24 09:05

制备的sop根据实际操作流程规范化细化就好了，问一下，各位有没有实验室规范管理的相关文件

作者: gyjjsw11333 时间: 2015-12-24 09:09

为什么下载不了呢

作者: 细胞海洋 时间: 2015-12-24 11:29

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$ u/ f, U" v1 e& V* I4 b7 S4 Q/ H
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