关于油红O染色

feiyang

请教大家！我做MSC诱导分化为脂肪细胞的油红O染色。1.在油红O加三蒸水3：2稀释后，没有通过定性滤纸，而是通过70um过滤篮过滤，然后静置，可是染色结果不好，看起来好多脂肪细胞并没有染上色，而且还是有不少杂质。2.一定要淡苏木复染吗？我没做。

glysh

hah 太巧了，我今天刚了油红染色，效果还不错。
( }5 @# `- a* }6 _2 G第一，没有滤纸的话，可以用口罩过滤；一般没有上色的很有可能不是脂肪细胞；
8 d  S7 \& r5 @1 G' Q5 F( I第二，不需要苏木素复染

regene

呵呵，同意楼上，不过滤问题也不大，但最好过滤以去杂质。
( Y2 ~' ?& ?- _5 O& T$ a) d4 ]; e即使不染色，脂滴在光景下也是很容易分辨的。

luoziwei

是的，显微镜下就能观察到油脂滴的

tangyvhuang

我们的规定是五步，但是基本上就是前两步就够了，后面的不做都，也不用过滤
/ I) H* F# g* G% f6 R4 g油红O 0.5g 溶于100ml异丙醇中作为储备液，用的时候同蒸馏水3：2的稀释6 R0 y6 C0 {  f4 D( [
脂肪细胞的油滴很明显的3 b' [+ i1 M. L7 z. e
1，固定：吸弃培养液后加入固定液5min.5 K5 O/ v4 m% I
2,吸弃固定液，加入染色液15min后水洗一次镜检观察。6 a7 S. N' g7 H" {! b3 L7 s
3，60%乙醇分色，
( k/ C- @- A3 A; W8 O( C2 M1 P4，苏木晶复染+ }1 _3 ^- {( |/ G: q
5，水冲洗至变蓝。8 h' D0 h# D5 n& }+ H6 x

feiyang

我镜下看到很多脂滴的细胞，就是没染上色，不知什么原因呢？

glysh

回复 feiyang 的帖子
" W' h& j- ^+ F% K3 \' t* g
* c4 d4 z! |9 A& ~, r" L很有可能是空泡！

碧海蓝天

油红O是为了染脂滴,而苏木素是为了染细胞核,可以帮助看清细胞形态,
% A2 B1 g5 ~' H) T我个人认为油红O在染色前是必须要过滤的,否则杂质太多,影响观察视野.
7 I" L5 x' m$ d3 i' \另外油红O染脂滴是很容易的,如果没有染上,那就可能不是脂滴而是空泡,
# {6 ^7 s; b4 F, w1 o) |& H还有如果低倍镜下看到有红色但看不清染色,最好换高倍镜甚至是油镜.

feiyang

那空泡是哪里来的啊？我染色的皿底有一块一块的染色，但是颜色非常深，镜下看就像是黑的，好像不对唉。

maxiaona

1、应该是需要过滤的，不然染色后观察时杂质很多。# }8 d' T+ j) z  k& r
2、要注意配好的油红O工作液要在2个小时内用，不能放置时间过长。
9 t; p6 |, i9 J- L. `( E3、苏木精复染可以使细胞形态更清晰，拍出来的照片效果也会更好。
  n1 o& t2 l6 T$ c4、之前固定的步骤很重要，没有染色很可能也和这个有关系，我们使用的是10%中性甲醛固定30分钟。
1 C$ S9 ~" j. p+ l8 ~" o& `