Western Blot 蛋白封闭可不可以过夜

yangjie0329

今天做的Western Blot 由于时间原因想封闭过夜，不知道可不可以，会影响实验结果吗，还是最好封闭两小时，然后封一抗，封一抗前还用洗膜液洗吗，有谁知道，请指教，谢谢。

张也行

那你不如再往下做一步，一抗可以4度过夜
2 D/ p* _. u2 X/ @, d: e0 C" }8 K

jiays

一般多抗，杂带多，都选择封闭4°过夜。如果是时间来不及，4°放置1-2天都没有问题，这一原则可以用在1抗杂交，二抗杂交，关键是4°。

yangjie0329

回复 张也行 的帖子4 }* r3 o" G! z$ m$ d8 m9 h

* N8 \* ]& _: V& w- E那样我得做到凌晨一点多了

yangjie0329

回复 jiays 的帖子( J, x$ C) d" A* e7 h$ U9 I7 _

: N, p. i# E  U- T) g- a0 l那要是单克隆抗体呢

runsong

如果使用脱脂奶粉的话最好不要过夜，会在膜上沉淀上渣子。# j! z" \- J- d( i/ K/ c
我好像在转膜后在tbst里放4度过过夜
' g% `0 C! u9 R" y7 n5 I不过一年多了，记不起来了

jiays

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! N% i0 q# x- i. B+ X. x4 {& G
6 L" M; G( ~" k; j" P  x0 v8 S. Y单克隆抗体也行，你放到四度睡觉吧，没关系

henson

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! X& O6 e$ L5 i5 o' B; _我以前也遇到这种情况,不过可以多倒一些封闭液,然后用保鲜膜密封.

Pseudomonas

我用BSA封闭液，经常在4度过夜。如果不放心可以放在摇床上慢慢摇。

dc1055

对于大分子量的抗体来说，封闭过夜是很正常的。
/ v7 r8 V' S* t% @对于小分子量的抗体来说，最好不要。