机械法传代如何更好的将干细胞团块弄碎

随风的天使

我做的是牛的胚胎干细胞，我采用机械法传代，但总是团块很大，请问各位高手机械法传代如何更好的将干细胞团块弄碎？

zpzp0312

楼主是传代？
/ @' i. W/ K; K) q( z还是分离？4 ?% x; _% B5 y; g, D" s1 h
按说传代时没有必要用机械法了，酶消化完全可以啊！
4 o! B* S! x5 B7 z" G/ K9 W: [即使是人的ES细胞

随风的天使

是的，在小鼠和人上干细胞传代都是用胰酶消化的，但是牛这种大的动物比较特殊，用胰酶消化容易分化，所以尽量采用机械法分离和传代。我曾经试着用胰酶消化传代过，效果不好，所以现在总是机械法传代，但是感觉块太大了。不知道有没有好的办法弄得块小点。

zpzp0312

是不是可以考虑将克隆挑出后，使用微针将集落撕碎。
3 s- R; @# h' g+ m" B3 ?% u8 Y# y或者直接用刀片将集落划成小块再接种到新的培养体系中。
: H& Y% u5 j8 l& j) E类似方法在人的胚胎干细胞传代中也常用到。
% e/ q: g& v4 ?- }! E+ W) a9 m但现在看来人的胚胎干细胞完全可以使用酶来消化，并不会造成大范围的分化。3 s) d3 W. v; P
因此，对于牛来说，或许培养体系还不完善，有待改进！! L; D( Z. R) n7 E; |
我想可以从信号通路寻找解决的方法，使用有关的化学试剂去避免分化，优化培养体系！
9 W# L5 q2 q1 B9 C呵呵，这只是一个想法，如果真的实施起来，还是有很大难度的

cortex

用巴斯德管拉的针，在干细胞集落上划井字形，然后轻轻挑起，集落大小均匀。刚开始有点困难，不过，熟能生巧！
8 v6 S  D3 e+ T7 L祝实验顺利！

have-a-rest

同意cortex的说法！: U2 \( M/ ^2 Z7 q
拉针很有技巧，拉熟了可以运用自如、出神入化，一般针越粗，挑的团块越大。
% v% I* S. ?0 y4 Y酶消化可以考虑dispase或胶原酶，胰酶也许不太适合！! q, F; d; w' E8 ~' |/ e
都样上牛的胚胎干细胞了，真牛！

jlhua

thanks

随风的天使

我每次传代时总是用口吸管的针将团块弄碎（团块大小不一），然后将团块传代，因为团块大小不一所以传代的克隆也是大大小小，总是出现不了在人和小鼠上那么漂亮的克隆。牛的培养液的确是没有很确定的体系，我现在也是在慢慢寻找合适的因子，保持它的未分化状态。如果用刀片切割是美容手术刀吗？非常感谢！

随风的天使

非常感谢，我每次使用口吸管拉成很细的针，也许是我的技术问题，撕成的团块很不均匀。我试试您的办法！

随风的天使

非常感谢！这几种酶文献中提到过，都有促分化的功能，我只做过用胰酶的，效果不好，还是只能是机械法传代。