请帮忙分析下RNA电泳结果

jiojoo

3 D2 _. G9 q: ?

8 b' E6 F3 K. D' R7 D提取了RNA，吸光曲线显示RNA非常纯
$ B: r# j% G* ~% P* s* ~) i但是电泳结果如图所示，感觉似乎降解的比较严重。+ D. U+ |* T9 f5 S) q: I) n* I, C; `
我电泳用的是普通的1%琼脂糖凝胶，不是变性电泳
! C4 s' O4 g9 b2 V3 z那些弥散状的东西是因为电泳不是非变性凝胶才产生的吗？
/ h  G* H2 W- C最下面最亮的是5s还是降解的RNA碎片？
$ ]$ \6 R: w4 j3 W

2011-12-4 21:53 上传

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1 s3 _% m0 F: G& {! l# E) V

2011-12-4 21:53 上传

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9 s4 I- y% ?0 V  o4 D( h% E28s上面还有一条带，是基因组DNA吗？: w* w  q3 Q9 _0 L( s! A+ Y
之前好像记得哪里说过，实时定量PCR对RNA纯度要求很高，反而对RNA完整性要求不高。
6 @( w. G( {* i  N如果只用来做实时定量PCR，这种降解程度是不是不会对结果产生影响的？* s' u8 Y+ q5 r( v7 w- M
忘各位前辈不吝指教

susuloveq

1%琼脂糖凝胶太小了，我都用2%多的胶跑，我建议你先用来做下内参咯，内参没问题的话就没问题了，降解有很多方面的原因的
  V2 x* w3 E# W1 F; Q2 h  t

susuloveq

还有你不要跑太久了，跑十几分钟看到两条带即可，跑太久RNA也会降解的，电泳槽也不太干净的

星移龙一

是降解啦，下图有一部分可以用，但上图太差啦，最前面的是降解的。
7 N' b& P9 S  K" Q  j, @而且我要说一下：susuloveq的说法我不赞同，我们每次的凝胶浓度是0.7%，这样可以快。

zxcv12345

回复 jiojoo 的帖子3 Z! N; }  K% P6 k/ e1 I; @

3 @- p$ ?8 h. Y- O从图片上看：
2 [9 P6 A4 [& L6 ]# Q. K  m有RNA降解
  i+ A! P9 J* R8 b: V还有明显的DNA污染

歪歪

建议消化DNA后再跑胶，RNA有些降解对你实验影响不大，但DNA污染做出的结果就不好说了。

cneagle66

下图中间三条带的RNA还可以，虽然有降解（一般28S应该更亮），但是还可以用，其他的标本，降解严重，如果对实验严格要求的话，这样的RNA最好不用。
* m6 E6 D- S/ sDNA污染：对于一般的RT-PCR来讲，设计引物的时候，可以横跨两个外显子，避免了DNA的干扰。对于荧光定量RT-PCR，我觉得也可以这样，比如我曾经用的SYBR green，它的扩增片段长度可以在200bp左右，完全可以找出横跨外显子的引物来。至于用探针的荧光定量PCR，我没有做过，没有深究过它的原理，因为扩增片段只有几十个碱基，可能设计跨外显子的引物比较困难，但也可以一试，不知道行不行。

ilovelife

还是要跑变性胶，否则RNA的二级结构导致你没法判断哪条带是什么。

ilovelife

还是要跑变性胶，否则RNA的二级结构导致你没法判断哪条带是什么。

huangcong1988

最上面那个应该是基因组污染，最下面的应该是5S带，感觉您这个RNA提取效果不是很好，RNA降解很严重，如果正常情况下，5S不会太亮，很亮的应该是18跟28S，另外，28S应该是18S的两倍亮是比较好的，还有就是如果做定量的话，RNA降解会有影响，但是有DNA污染比RNA降解影响更大，有基因组污染会严重影响定量结果。不知道您是用试剂盒提的还是直接用TRIZOL，还有，不同品牌的试剂盒提取效果差异很大，另外，您一次提了那么多样么？一次提太多RNA降解严重是肯定的，建议提RNA一次还是少提几个样，操作时间太长，会使RNA降解的