请教下，小鼠胚胎干转染miRNA用的转染试剂

cailand

听说Lipo2000转染小鼠胚胎干效率不高，不知道做过的人都是用什么转染的？谢谢啦

Yedan

你说的miRNA是mimic吧（如果是载体，那就不用讨论了），转染mES14.1，我用过Lipo2000，FuGENE HD（新出的XtremeGENE HP也用过），这些都可以转染的，而且效率都很高。你有做带荧光的Control转染吗，如果有图片，发上来看看吧，帮你看看。

歪歪

你转染步骤是什么？

cailand

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9 i" f2 X. k4 ]. Q1 v3 e6 U& P" }
$ e  o7 Z* ]6 S/ t3 i# D对的，mimics，转染R1, 准备用lipo2000，还没转过带荧光的mimics，我转转试试，准备种板的时候悬浮转染，请教下，36小时收样合适吗？

Yedan

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+ ?- \) _* t+ m- _. I
3 n9 f; z6 W2 S0 G3 [你是想测靶基因的表达变化吗？定量还是western？
8 V9 Z  _  z# ?' x2 C5 r3 R; v0 Z/ XMimics的效力大概就72h，所以你自己得估计一下实验安排。
! D1 _$ U1 ~3 E, y6 B3 f: g36h收样做定量还行，western要看杂什么东西了，有些蛋白降解得比较慢，可能还得拉长时间。

cailand

回复 Yedan 的帖子! B+ Z" w: }. ]

( a+ x3 n7 p5 A/ E, _谢谢啦，我是做Q-PCR检测靶基因。

Yedan

回复 cailand 的帖子2 m1 Z1 B( X, f! ~" p# u  ^
3 z5 h% N6 [3 K$ g8 l7 w
噢，我的做法是铺板后12h转染，换液。然后收post transfection 48h样品。金颖组的做法是铺板后24h转。两种方法我都有试过，感觉24h转，到收样品的时候太密了，有些分化，有时候结果会比较tricky

siyue13

看来是药物所的达人，刚在药物所门口打不到正规出租车的飘过

cailand

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* C& ~  H8 C, W3 \  q1 D
" m6 M5 r2 N7 i4 o9 N谢谢啦，按你说的方法我先试试！

sciencezhu

对了，我想请教下yedan, 如果是转miRNA 后收RNA样品做qpcr,你是在feeder上转的吗？还是无Feeder,我最近也在试miRNA转mES，没成功，可能的原因是细胞状态不好，能否将你的mES培养经验以及转染步骤教教我啊，谢谢了！