请教下，小鼠胚胎干转染miRNA用的转染试剂

cailand

听说Lipo2000转染小鼠胚胎干效率不高，不知道做过的人都是用什么转染的？谢谢啦

Yedan

你说的miRNA是mimic吧（如果是载体，那就不用讨论了），转染mES14.1，我用过Lipo2000，FuGENE HD（新出的XtremeGENE HP也用过），这些都可以转染的，而且效率都很高。你有做带荧光的Control转染吗，如果有图片，发上来看看吧，帮你看看。

歪歪

你转染步骤是什么？

cailand

回复 Yedan 的帖子4 M/ K3 N0 ]; R) H6 o: @
# s% y* R0 m: O% m4 W8 ]$ H. H
对的，mimics，转染R1, 准备用lipo2000，还没转过带荧光的mimics，我转转试试，准备种板的时候悬浮转染，请教下，36小时收样合适吗？

Yedan

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+ i: q, G% w3 ?2 t- P5 S5 O( X4 m
8 u3 l) ]/ A5 v* Y& z1 ~8 B你是想测靶基因的表达变化吗？定量还是western？
4 B2 A0 r: |* @+ mMimics的效力大概就72h，所以你自己得估计一下实验安排。+ p  P9 {( e9 I
36h收样做定量还行，western要看杂什么东西了，有些蛋白降解得比较慢，可能还得拉长时间。

cailand

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# \! P! o0 g% ?' ~8 W7 [% z( J* i
谢谢啦，我是做Q-PCR检测靶基因。

Yedan

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% a( q8 [) L$ ^$ |  w! [; j8 w1 V# a
噢，我的做法是铺板后12h转染，换液。然后收post transfection 48h样品。金颖组的做法是铺板后24h转。两种方法我都有试过，感觉24h转，到收样品的时候太密了，有些分化，有时候结果会比较tricky

siyue13

看来是药物所的达人，刚在药物所门口打不到正规出租车的飘过

cailand

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* s9 v" g$ J+ u9 _6 H/ e& O0 Q" I9 J" L1 {0 {7 _5 {& B
谢谢啦，按你说的方法我先试试！

sciencezhu

对了，我想请教下yedan, 如果是转miRNA 后收RNA样品做qpcr,你是在feeder上转的吗？还是无Feeder,我最近也在试miRNA转mES，没成功，可能的原因是细胞状态不好，能否将你的mES培养经验以及转染步骤教教我啊，谢谢了！