猪ipsc克隆形态不典型，怎么回事啊？

Yorkshining

    用Tet-on系统诱导猪的细胞为ipsc，基本程序是在5:1,10:1,20:1的感染复数下分别用病毒感染10万细胞，48h后1:4将其传至六孔板中，一般第五天即出现大量的克隆，在第十天挑取克隆，先挑至96孔板中，一个克隆一分为二（一孔用于AP染色），将阳性孔对应的复孔ipsc机械法传至24孔板中,再机械法传至六孔板，随之T25瓶扩大培养。但是一直遇到的问题时目前已传至六孔板中，但是克隆的形态一直不典型，在96孔板中时，克隆呈AP阳性（图1）

Yorkshining

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3 x; X% \$ i0 p3 Z# i! I但是一直遇到的问题时目前已传至六孔板中，但是克隆的形态一直不典型，在96孔板中时，克隆呈AP阳性（图1，由上往下第一张），当然也有一些克隆仅局部AP阳性（图2，由上往下第二张），传至24孔板时克隆凸起饱满（图3，图4，由上往下第三，四张），一直未得到典型的猪ipsc克隆形态（图5，由上往下第五张），传至六孔板中依然如此（图6，由上往下第六张），不知道大家在做猪或其它物种ipsc的时候有没有遇到过这种情况，问题出在什么地方，望指点，不胜感激……

genedu

倒数第二张图片，状态很好啊，是不是刚刚又倒出来，没有进行传代的？* T4 D: z% r$ C9 V

genedu

倒数第二张图片，状态很好啊，是不是刚刚诱导出来，没有进行传代的？
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Yorkshining

回复 genedu 的帖子% ?) P' W; |! \+ p. q0 K
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那是从其它单位直接拿来的细胞，不是自己诱导的……

genedu

回复 Yorkshining 的帖子/ @* y8 x/ q, b6 R, g
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那质量就无法保证了，根据现在发表的文章来看，猪的iPS细胞还是一个盲点，还没有人能够做出真正的猪iPS细胞，其实这个细胞涉及问题还挺多，比如说1.他的培养体系您知道吗?是采用的小鼠的，大鼠的，还是人的？2.他的诱导系统是什么？病毒转染，PB，dox，episome等等？3.他的培养方法和您的是否一致，比如说有没有明胶？用不用feeders之类的。先把他的了解清楚，再找原因

gact

这么快就可以出来克隆啊，不是两周么？

Yorkshining

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* O' x: [1 S$ s' {" B也许我们的毒包的质量比较高吧……

xiphias

回复 genedu 的帖子7 k1 Q4 |4 b9 E8 m1 s  M2 ^" x

3 ^& b' q/ w" `倒数第二章图的形态确实和人iPS很像。/ x1 w3 ~2 K  R7 y1 _& T* r
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用的培养基加了抑制剂？& E' K3 |8 F0 J. C; N5 o" m

" k( C* t) p4 \从feeder状态看，好像每个图的细胞的培养条件不一样。

Yorkshining

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嗯，你观察的很仔细，因为我们用的是DOX诱导系统，所以不需要加抑制剂，倒数第二张当初用的ICR的feeder，而其余用的是CF-1的feeder2 r6 {- [& K5 I, a7 O5 I8 k