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你说“用淋巴细胞分离液分离单个核细胞时,没有出现明显的淋巴细胞层,而是与分离液混在一起”,现在的问题是你分离的是不是淋巴细胞。8 D2 b! C7 P, g. Y, f
我们的分离方法:, k7 }# J5 p8 Z) Y% ]' w! f/ E' t
将25 ml稀释的血标本(全血去血浆后与盐水1:2混合)缓慢加入盛有室温的15 ml人淋巴细胞分离液的50 ml无菌离心管中。离心(参数相当重要),慢升慢降。离心完毕后,离心管内出现明显的分层,由下到上分别为:红细胞层、粒细胞层、Ficoll层、单个核细胞层和血浆生理盐水层。吸取血浆层弃之,直至距白膜层5毫米(mm)处。将红细胞层之上的所有液体转移至离心管。; G! }; a# h# h" W# d1 ]2 X% W m- ~
/ N+ _' e* F8 {1 U4 L4 `4 u诱导CIK,细胞增殖缓慢,培养基的类型,添加的因子量很关键。不知你是怎么做的?/ w* Q3 t0 v# ?( [# e. K; D2 |7 }
/ E) Q b% u& Q" O# |$ j( F6 o
我们做脐血诱导的CIK细胞增值效果是非常强的,比成人外周血效果好得多。 |
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