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请教大家一下,我的染色步奏有没有问题?/ ^ s" A" I6 P ~8 |9 A
1、第一代大鼠骨髓间充质干细胞80%融合时,胰酶消化,含10%血清培养液进行终止,1000转,6min离心一次,然后加入ph7.4的PBS洗涤一次,加入0.5ml的PBS重悬细胞。
( }/ |/ n) I$ I& u* h( {7 N0 ^- y9 ?1 b2、加1微升的一抗CD34、CD45、CD90、CD105,冰上放置30min。9 p |, G/ o2 H; ]" r
3、加PBS洗涤2次,以0.5mlPBS重悬细胞,加入相应二抗1微升,湿冰避光放置30min。" j _4 g- J6 p7 J w# a
4、加PBS洗涤3次,以0.5mlPBS重悬细胞,上机。, Q9 [' K0 y2 K* l* P) n% {6 ~
* J3 `, J8 \+ G* v, y
结果四种抗体及阴性对照的图基本上一样,结合率非常低,0.7%左右。1 u' x" R h8 @$ [4 f8 {% i
请问各位应该是什么步奏有问题,应怎样改进。急求各位指点 |
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