免疫荧光二抗用什么稀释？

请叫我晓白

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8 ^2 E( d, z2 r8 [一抗规格是100ug/200ul的请问一般用什么浓度呢

xiaoyurly

回复 请叫我晓白 的帖子4 ?" \' ^& ^7 U4 p4 T$ }. J
$ p) t, k$ d" n7 \' ?& ~+ B/ {8 j4 s
是这个意思，再尝试一下吧，免疫染色有时候确实难出，加油

xiaoyurly

回复 请叫我晓白 的帖子
8 D( s4 ]( c7 V9 d- p+ h0 v4 c( c9 s  v" I/ N
c-kit染色确实不必破膜的，我们以前也做过大鼠冰冻切片但是效果不尽如人意，后来用了石蜡切片经过抗原修复才出的结果，而且我们是用santa的抗体都能出（1:100），荧光染色我们从不用H2O2处理，可以上一张图片给你看下，心肌切片

ruth891005@yaho

PBS或者BSA都可以，可以都试一下，比较一下效果

请叫我晓白

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" ^, W: {$ N- k/ y5 W- h, B3 w. Y' |2 `* V" X* s8 Q
多谢老师耐心解答
; |" `7 X4 R1 ?9 g  M; P& g! q能copy一份您做石蜡切片免疫荧光的步骤给我吗- `# }6 Y8 m. o! |* h+ y: C/ [
刚接触实验很多都不懂7 d4 U4 N+ T3 c- S3 b
多谢了

xiaoyurly

回复 请叫我晓白 的帖子5 m9 ]. n7 j) O  |) [
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石蜡切片常规脱蜡复水，柠檬酸缓冲液热修复，88-96℃ 15-20min，冷却1h后PBS洗一次，羊血清（原液以1:20比例用PBS稀释）封闭室温30min，一抗1:100溶于含羊血清1%的PBS中，4℃过夜；转天取出复温1h左右，PBS洗5min×4次，对应荧光二抗孵育，4℃ 4h or室温1h，PBS洗4次，封片镜检

请叫我晓白

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! Y% `8 Z" C- [  i  P' f% O/ l, I5 y1 N. U  B4 x8 v: y" O
多谢多谢

nevermore

用BAS稀释抗体和用PBS稀释 原理上有什么不同？我试过用PBS稀释，信号强度很弱。另外，抗体浓度过高会使结果强度降低么？为了提高荧光强度，我特意提高了点工作浓度，可效果还是不好，其他步骤都是按照标准protocol

细胞海洋

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% h% r: L* M: `建议你发新帖提问

请叫我晓白

xiaoyurly 发表于 2013-3-18 09:50 3 y! S$ e, n7 E0 z2 ]
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3 p1 ?( K+ O+ c1 o" `c-kit染色确实不必破膜的，我们以前也做过大鼠冰冻切片但是效果不尽如人意，后来用 ...

5 @5 ^/ G- G4 Y0 R2 E" }% [
老师，我最近做了几次都没有结果您图片上的结果。哎 郁闷。我想请问您当初做冰冻也没做出来会不会是因为c-kit这个抗原不适合做冰冻切片？需要做石蜡切片才行？我想可能有几个原因：1.c-kit+细胞很少没有切到或找到2.一二抗浓度不合适3c-kit这个抗原不适合做冰冻切片
5 a5 K% |& W) H3 f. X$ A' v就您的了解c-kit是否可以做冰冻切片呢？我看了许多国外文献他们的染c-kit的方法都是免疫组化用石蜡切片（具体方法太简略了），但是结果的图却是共聚焦的图。期待您的解答。还有您做的是骨髓的c-kit细胞吗？我做心脏固有的c-kit细胞