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[讨论] 实验室的日常清理,做一名合格的扫地僧 [复制链接]

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发表于 2019-2-14 17:43 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
PCR实验里最怕出现什么问题?当然是辛苦做出来的结果假阳性了。
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7 \8 U, F4 I8 e* a! }当PCR出现假阳性的时候,我们常常会考虑是不是引物/Mix/*等等污染模板,然后一一排查,劳心劳累费时费力,有时还是找不到原因,简直要崩溃。" q; E* R7 Y4 _8 A1 R: ]
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这里我觉得要延伸思考一下,这些试剂仪器到底为什么会被污染了呢?其实是核酸气溶胶污染。 $ C/ W8 {3 j1 \- G7 f
5 C" A' y9 W+ Q7 z! z" m# x

7 [& O( V5 q* G, X离心机离心/剧烈地摇动反应管/PCR开盖/吸样时及移液器的反复吸样等等,会产生空气与液体表面摩擦的,都会产生核酸气溶胶,也就是实验室里(或移液枪内)弥漫着含有长短不一核酸片段的小水珠或小颗粒,这些小颗粒沉降(打到)到空白样中导致最后扩增出了条带。* {5 o3 I# @/ f9 r
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4 i, ?% T# q1 Q* T" X8 t/ b) J! H
可想而知,这些核酸小液滴还会落到实验台面/PCR仪/移液枪/*头*盒子等等地方,如果我们不注意,这些核酸小液滴就会日积月累地积聚,这样做实验就特别出现问题比如PCR假阳性。0 C! j3 X# s+ q+ k

) s$ j* |7 t5 V
" U: w" `4 e3 w0 S' H那么我们平常做实验或者实验室管理上核酸气溶胶(也就是核酸小液滴)产生了巨大的污染究竟该怎么办呢?
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大面积核酸污染清除操作方法:& F# T$ P5 B/ x* |( m+ }; v1 u

* x) O0 x7 n& r6 s) L: E
/ \- Y2 H4 R/ J# J0 \(1)对污染区域使用核酸气溶胶污染清除剂(PCR Cleaner)进行大面积处理,包括:地板、墙面、天花板、门、窗户等地方,同时加大通风量(内循环无用,尽可能外循环);
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(2)对污染区域内的设备使用核酸气溶胶污染清除剂(PCR Cleaner)进行反复处理;对超净台等含有空气过滤系统的设备,请更换过滤网;对移液器等污染设备采用核酸气溶胶污染清除剂(PCR Cleaner)进行清洗,高温灭菌;7 p, h0 X7 O. u  T
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(3)待污染区域及设备器件清理完成后,使用紫外灯辐照4小时以上;, f4 u9 y/ p5 W( d6 E# R
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(4)可请保洁员按照上述要求(1)(2)(3)连续清理三天;7 v* O0 s6 P( s8 N! N2 r

& l0 u" h+ o5 w0 Y1 R: B6 C( n; b(5)设计实验对照组(根据污染源基因片段),进行阴阳对照实验,根据阴性对照确认污染情况,可采用8连排PCR管(2个阳参+6个阴参);若阳参起跳,阴参起跳,则污染需要继续清理;若阳参起跳,阴参全部不起跳了,则说明污染等到控制,可恢复正常实验;' n! j% O9 @$ }

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核酸气溶胶污染清除剂(PCR Cleaner)一盒500 mL;10平米的房间需要2盒可完成覆盖;其他设备及器件根据情况进行采购;
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大面积核酸气溶胶污染非常难以清除,若不立即采取清理,污染会更加牢固,长期释放污染核酸,导致实验室停工。
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