准备做一下2i+B27，无feeder培养mES

igdb

准备做一点无滋养层的ES培养工作，打算先试一下DMEM+LIF+2I+B27的配方，大家有什么建议嘛？另外，2I和B27的浓度用的是多少，具体是怎么配置的，自己还拿不准，还请大家提出建议。。。
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  实验结果会和大家随时分享的。。

jessewill

是mESC还是hES呢，我养得mESC,无饲养层，第二代就不行了，没有加2I，其他的跟你一样

igdb

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  q  R$ V3 f4 k+ M' M1 R& S/ N8 k* g- j$ `2 V9 F1 S# G
我养的mES..   听说加上2i和B27可以做到ES的无限传代。。我想试一下，具体这几种试剂是怎么个配法，我还有点拿不准。' T: Q; t2 m9 p4 W/ V

shangchunhua

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' n3 C# D9 ^6 z, [+ |6 T楼主买的哪家公司的2i呢？你这个培养基的配方我还没有看到过啊，是已经发表的文献中的吗？

igdb

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4 I( r2 `# Z; y; X1 S: @, s
# R; r7 G" v2 u7 D* ~% d, f2 N我在MERCK买的。。那篇GROUND STATE的文章里有用过这个组合吧。。另外也听别人提起过。。

shangchunhua

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* ~0 B. W4 z5 Z7 Z; b1 L: j% p
/ y, h, E1 H3 ]* f  P( v5 K楼主做的怎么样啦？可以分享一下吗？

igdb

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7 E* ^( |1 A) t& z+ N+ z- U, c  e
挺好的，我觉得。。

shangchunhua

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2 k$ ?- p" [/ O* Q. Q6 G
0 N* ?) O& z$ R3 b" d. q- [* k知道啦，多谢！

holywater

我虽然重点不是干细胞，但是我对B27用过很多
1 S) L3 c: V6 J  B. t- i" i. Q7 d: {& ]3 j! j8 P
其实你可以试试neurobasal+B275 t" v7 i2 |% F( z8 @, M8 I

; x4 h% L$ N+ ?+ G我说下自己的经验： ! L9 V7 D5 M+ X

, ?8 s8 O) h3 T. B( h1 FGF2对成纤维细胞有强大的刺激分裂作用，请确保分离时候别带入过多的成纤维细胞
2 p; V: {( V5 S% H2 c/ c5 L! d; o; c3 y/ f6 z6 c
2.由于FGF2 用量很低，有的EP管子会吸附蛋白造成FGF2浓度进一步降低。解决方法是配制FGF2溶液时候先向其中加入一定浓度的BSA0 o/ m# u$ i9 u. ?6 d. a! L

/ |( a, ^3 Z8 t6 M详细情况请看invitrogen的说明书，我记得是一定浓度的TRIS-HCI加BSA
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3 FGF2容易被血清之类的东西灭活，所以记得看看有没有冲突。

holywater

啊，抱歉，我以为是养神经干细胞呢。。