猪ipsc克隆形态不典型，怎么回事啊？

Yorkshining

    用Tet-on系统诱导猪的细胞为ipsc，基本程序是在5:1,10:1,20:1的感染复数下分别用病毒感染10万细胞，48h后1:4将其传至六孔板中，一般第五天即出现大量的克隆，在第十天挑取克隆，先挑至96孔板中，一个克隆一分为二（一孔用于AP染色），将阳性孔对应的复孔ipsc机械法传至24孔板中,再机械法传至六孔板，随之T25瓶扩大培养。但是一直遇到的问题时目前已传至六孔板中，但是克隆的形态一直不典型，在96孔板中时，克隆呈AP阳性（图1）

Yorkshining

回复 Yorkshining 的帖子
! r  b, s4 M/ _7 x. D
3 M6 \. Y, ], ?) M. c2 N但是一直遇到的问题时目前已传至六孔板中，但是克隆的形态一直不典型，在96孔板中时，克隆呈AP阳性（图1，由上往下第一张），当然也有一些克隆仅局部AP阳性（图2，由上往下第二张），传至24孔板时克隆凸起饱满（图3，图4，由上往下第三，四张），一直未得到典型的猪ipsc克隆形态（图5，由上往下第五张），传至六孔板中依然如此（图6，由上往下第六张），不知道大家在做猪或其它物种ipsc的时候有没有遇到过这种情况，问题出在什么地方，望指点，不胜感激……

genedu

倒数第二张图片，状态很好啊，是不是刚刚又倒出来，没有进行传代的？; X% K& [0 N7 c. ^; B6 r

genedu

倒数第二张图片，状态很好啊，是不是刚刚诱导出来，没有进行传代的？
0 [; Y0 i; N2 ^# D5 x, x; k

Yorkshining

回复 genedu 的帖子, `" y4 x4 p! p5 a
7 P7 l  f# B  Y5 Q: x
那是从其它单位直接拿来的细胞，不是自己诱导的……

genedu

回复 Yorkshining 的帖子' ?3 P6 v7 {, Q* I8 _: `

/ f/ j2 K' x) \那质量就无法保证了，根据现在发表的文章来看，猪的iPS细胞还是一个盲点，还没有人能够做出真正的猪iPS细胞，其实这个细胞涉及问题还挺多，比如说1.他的培养体系您知道吗?是采用的小鼠的，大鼠的，还是人的？2.他的诱导系统是什么？病毒转染，PB，dox，episome等等？3.他的培养方法和您的是否一致，比如说有没有明胶？用不用feeders之类的。先把他的了解清楚，再找原因

gact

这么快就可以出来克隆啊，不是两周么？

Yorkshining

回复 gact 的帖子
7 W! ?, k- Z! |; ^1 X% _+ }6 F
  D, O0 Q  I- x( ?也许我们的毒包的质量比较高吧……

xiphias

回复 genedu 的帖子, _9 `9 w9 I& ]8 k4 S, _
. d  b4 z5 K  F! Q
倒数第二章图的形态确实和人iPS很像。' h8 c+ z4 b1 t# v" x( ~% D
" p+ s& x- Z, b9 Q6 {
用的培养基加了抑制剂？
* Z* h$ i1 w; v1 p5 T, x9 `! N5 K4 u+ L
从feeder状态看，好像每个图的细胞的培养条件不一样。

Yorkshining

回复 xiphias 的帖子" G. u0 x( Y6 I- V
0 N; w6 R# E0 A' M6 W9 v
嗯，你观察的很仔细，因为我们用的是DOX诱导系统，所以不需要加抑制剂，倒数第二张当初用的ICR的feeder，而其余用的是CF-1的feeder
* Z" P7 n1 J, U+ w; z2 `* }5 \