我想问下，脐带血中分离出的造血干细胞还可以扩增？

jiuxuya

我在朋友在几个血库的朋友告诉我，他们都是分离完直接冻存的，不扩增。为什么论坛里好多说扩增的？

hefan1234

目前的培养技术还不能使体外培养的造血干细胞大量扩增，最多只能少量扩增，维持动态平衡都很难。造血干细胞在体外培养基本不增殖，即使能够增殖也少于其分化的数量，所以造血干细胞一般都是越培养越少。

jiuxuya

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, b2 Y5 U/ V8 S+ C# {6 ]
! f2 V3 Q( j; L+ X! r非常感谢你的回答，请问现在一般都用羟乙基淀粉中的自然沉降法来分离脐血中的造血干细胞吗？

jiuxuya

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) J, \/ ~# @+ a+ x( d+ @4 R; E) w8 f% w9 T- d/ ^0 c( m1 X
还有一个问题，这个是我另一个帖子里的，，我想问下此种分离方法的大概流程是怎样的？比如加入百分20的淀粉后，就是连着注射器静置30到60分钟吗？是不是此过程需要用那种大型的架子含有夹子的那种来夹着血袋然后让血袋静置？如果是的静置完后下一步怎么办？血袋里发生分层了吧？上面是白膜层吗？吸出来？到另一个血袋吗？然后再离心？对吗？离心之后怎么做呢？

MCARS

羟乙基淀粉沉降法制备造血干细胞对淀粉浓度是有要求的，超过3%就会导致红细胞交联夹带部分干细胞沉降，回收率会比较低，浓度低于0.6%的话就基本没有沉降效果了，自然沉降30分钟就可以了，也可以摇匀后80g离心10min，然后取上层血浆和中间白膜层

jiuxuya

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, J( I$ E' z1 K( c1 u
谢谢您再次回复，您说超过3%就会夹带部分干细胞沉降？现在流行的都是6%羟乙基淀粉不是？那岂不是大多数公司都选错浓度了？另外还是像您说的，自然沉降和离心还是离心效果更好是吧？

hefan1234

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/ [, w$ K" [5 W; g) d4 V9 ]# G( q赞同楼上MCAR，一般脐血库都是用羟乙基淀粉来沉降去除红细胞，剩下的各类细胞混合冻存保护液后直接冻存，这样的优点是操作简单，操作时间短，成本低廉，造血干细胞得率高；缺点是得到的造血干细胞不纯，混合了大量其他细胞。如果是科研提取造血干细胞的话，也可以用淋巴分离液来得到白膜层，离心洗涤后用流式分选得到CD34和CD133双阳的造血干细胞（不同实验室选取的表面标志可能不同）。

hefan1234

有科研研究中表明造血干细胞混合其他干细胞，特别是间充质干细胞，移植的效果会更好，可以缓解和改善造血干细胞移植后发生的GVHD症状，所以目前来说国内的脐血库冻存的造血干细胞都是混合其他细胞的细胞群，由于造血干细胞占比很低，因此在造血干细胞移植案列中很多都是多份造血干细胞联合使用。

jiuxuya

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) M8 z5 E8 f4 V5 \3 J0 g, a+ _% o) E( M
) k9 {. D5 `4 d# E& c谢谢大兄弟的回复，我们也是做储存的机构，准备开展脐血库这块，我想问下是不是采用自然沉降法也需要放在离心机里去离心？另外您能不能从加入百分20的淀粉这步后边说明包括血袋要倒置？然后放血？然后呢？谢谢

MCARS

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% L' @9 R/ }: t" z/ `3 b5 v" y# m5 U/ y
用6%的羟乙基淀粉是和血液1:4混在一起5倍稀释的，终浓度还是1%点多