关于油红O染色

feiyang

请教大家！我做MSC诱导分化为脂肪细胞的油红O染色。1.在油红O加三蒸水3：2稀释后，没有通过定性滤纸，而是通过70um过滤篮过滤，然后静置，可是染色结果不好，看起来好多脂肪细胞并没有染上色，而且还是有不少杂质。2.一定要淡苏木复染吗？我没做。

glysh

hah 太巧了，我今天刚了油红染色，效果还不错。# M5 F0 F* U+ X* P) S0 W' R) S
第一，没有滤纸的话，可以用口罩过滤；一般没有上色的很有可能不是脂肪细胞；8 C" ~- l/ x" S2 {$ ]5 k& G+ s- E
第二，不需要苏木素复染

regene

呵呵，同意楼上，不过滤问题也不大，但最好过滤以去杂质。
" r; l0 R2 f# G  I即使不染色，脂滴在光景下也是很容易分辨的。

luoziwei

是的，显微镜下就能观察到油脂滴的

tangyvhuang

我们的规定是五步，但是基本上就是前两步就够了，后面的不做都，也不用过滤3 L6 ]8 p: h2 u  c
油红O 0.5g 溶于100ml异丙醇中作为储备液，用的时候同蒸馏水3：2的稀释. ~, C/ R! A0 N. ^! g  y' Z
脂肪细胞的油滴很明显的
' O* ?; S1 f$ m$ f6 K5 ~3 }9 v# _1，固定：吸弃培养液后加入固定液5min.
; ?* [# w% l3 }- E7 J2 J2,吸弃固定液，加入染色液15min后水洗一次镜检观察。- H1 N5 n* i9 q
3，60%乙醇分色，
: U9 s4 w. F7 z8 p/ ]4，苏木晶复染6 T% h& K# C* w3 _9 a
5，水冲洗至变蓝。3 F" `6 [  P6 C1 e. ?

feiyang

我镜下看到很多脂滴的细胞，就是没染上色，不知什么原因呢？

glysh

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( R8 J+ j$ q6 `' a# D
9 w( M4 y& o. y) m很有可能是空泡！

碧海蓝天

油红O是为了染脂滴,而苏木素是为了染细胞核,可以帮助看清细胞形态,/ Q& e1 H- n& D" s
我个人认为油红O在染色前是必须要过滤的,否则杂质太多,影响观察视野.
, Z# @- Y* ^( l  b另外油红O染脂滴是很容易的,如果没有染上,那就可能不是脂滴而是空泡,
" j* w  U6 ~! X! Z3 ]. }. c还有如果低倍镜下看到有红色但看不清染色,最好换高倍镜甚至是油镜.

feiyang

那空泡是哪里来的啊？我染色的皿底有一块一块的染色，但是颜色非常深，镜下看就像是黑的，好像不对唉。

maxiaona

1、应该是需要过滤的，不然染色后观察时杂质很多。- U1 j6 }& q- j3 I& m( v& a1 T# S3 K
2、要注意配好的油红O工作液要在2个小时内用，不能放置时间过长。
- I$ B5 l' Q1 {: r; k3、苏木精复染可以使细胞形态更清晰，拍出来的照片效果也会更好。7 ?- D$ s; k4 l
4、之前固定的步骤很重要，没有染色很可能也和这个有关系，我们使用的是10%中性甲醛固定30分钟。* ]. X& Y$ t7 I) r7 V