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可参考BIOG实验步骤5 [9 [/ }8 ^' L) _: B! C; s7 c
(请自备50mL离心管、20mL离心管、异丙醇、70%乙醇)
+ c0 {' u" x2 e! C取50mL菌液，置于50mL离心管中，4000rpm 4℃离心5 min，彻底弃除上清。% ], } ~( n4 q4 ?" ^- ~9 S3 g% O
加入3mL溶液A，充分振荡2min，使菌体充分悬浮，确保无絮块存在。4000rpm 4℃离心5min，彻底弃除上清。+ m# E0 f" Z5 T5 T/ r
加入2mL溶液I和40uL溶液B，充分振荡2min，使菌体充分悬浮，确保无絮块存在。
. Z/ o0 ~! K# ?/ a' x0 e$ c; t加入4mL溶液II，盖紧管盖，轻轻颠倒混匀6次，注意整个管子的内表面均需与溶液II接触，室温放置至溶液清亮。（一般为4-5min，如5min后溶液未变清亮，说明细菌过多，应考虑减少菌液量。注意混匀手法要温和，不要剧烈混合）6 a$ g5 X8 `( ]+ t
加入3mL溶液III，盖紧管盖，立即轻轻颠倒混匀8次，4℃放置5min。（此步注意要尽快混匀，但手法要温和）
* w1 V* E8 |! ^! n" W10000rpm 4℃离心15min，小心吸出上清，轻移至新的20mL离心管。（应在离心机自动停转后取出离心管，以免沉淀悬浮）5 [3 G0 K" j8 J' L! Y# o# v
加入6mL异丙醇，充分混匀，室温放置10分钟。10000rpm室温离心15min，小心吸弃上清，用吸水纸尽量吸去残余的液体。
$ t, m/ U' ]/ h- ^+ ]: G（应在离心机自动停转后取出离心管，以免沉淀悬浮）# j! M* n( S S+ i
加入3mL 70%乙醇，温和震荡30Sec，10000rpm离心10min，轻轻弃去上清，用吸水纸尽量吸去残余的液体，室温晾干沉淀。8 n$ c; N5 }- u4 q7 c
加入0.3mL溶液IV，温和震荡2min，使沉淀完全溶解并转移至新的1.5mL离心管中。1 E5 k1 O9 n' m" A) c. z
加入10%体积溶液V，充分混匀，冰浴5min。
2 u0 p ~ g7 x$ u9 \0 D加入3%体积溶液VI，反复吹打混匀，旋涡震荡15min。8 m; u6 p+ g7 e- y
50℃水浴5min，室温12000rpm离心3min，溶液分相后，吸取上层水相至新的离心管中。
6 k0 F* |& y/ s. h0 _; I q重复步骤10~12两次。
5 |6 h0 o6 U2 I# s1 a3 A3 Z% t加入700uL无水乙醇，充分混匀，室温放置5分钟。12000rpm离心10min，小心吸弃上清，用吸水纸尽量吸去残余的液体。
$ d h! W! Y& g; _加入700uL70%乙醇，温和震荡30Sec，12000rpm离心5min，轻轻弃去上清，将离心管倒置于吸水纸上，吸去残余液体，室温晾干沉淀。4 h! J% t2 v+ V* i3 D
加入50μL溶液IV，温和震荡2分钟，使沉淀完全溶解。 |
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发表于 2012-8-13 15:10
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