解读胚胎干细胞培养

zhounanhi

    对于小鼠胚胎干细胞培养有个不明白的地方：干细胞培养时是铺在饲养层上的，那么在传代和冻存的时候对细胞的消化就连饲养层细胞一起消化了，那么传代和冻存的细胞里不就不只是干细胞而掺有饲养层细胞了吗？
" M$ V7 `& M/ c. B/ f7 f! @  另外还有个疑问：我查文献也看到胚胎干细胞可以无饲养层培养，那么具体方法是什么，直接用明胶处理后再铺上干细胞就可以了吗？

song58

是的。
" I6 B4 W: d& j. H7 R是的。

zhounanhi

那冻存的干细胞里掺了饲养层细胞会不会影响后续实验啊？$ P5 }6 [! ^# k& K

yuyan

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1 D; D) i4 ]4 L0 t( H: [1 l3 s+ ~1 d
feeder细胞没有增殖能力，传代过程中会逐渐死掉。

song58

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. ~$ d; m) F; x
; R8 s! P& P, h1 B& y, o# P再复苏、传代的时候，这些feeder几乎都不贴了

zhounanhi

谢谢各位的解答！

安静的折腾

小鼠的胚胎干细胞feeder-free培养，用明胶gelatin 37度包被大概40分钟，然后种上mESCs即可。/ t7 t& c1 C8 H$ V
注意：mESCs feeder-free培养用的是N2B27培养基，N2B27 (200ml): Mix 100 ml DMEM/F12,100 ml Neurobasal medium, 1 ml N2 stock, 2 ml B27 supplement, 1%Glutamine, 1%NEAA, 1% Sodium pyruvate,200ul β-Mercaptoethanol,以上是基础培养基的配方。用来culture mESCs还要加2i（PD0325901+CHIR99021）+Lif
) @' M' p, ]' u9 K4 K

安静的折腾

当然你也可以参照Astin Smith实验室的配方，参照下面的文献
8 r. O  M0 I$ n2 c' I% D" a* x

zhounanhi

相当感谢楼上的回答，点回复没反应，不知道您能不能看到，呵呵！

细胞海洋

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什么浏览器？最好用ie