随机引物做RT-PCR - 实验室综合讨论区干细胞之家

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金话筒优秀会员

楼主

发表于 2012-8-1 21:17 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

想请教下，用随机引物做RT-PCR时，是怎么扩出全长的cDNA的？
比如一段1000kb的mRNA，如果有引物结合的位点在100bp处，最后扩出来是不是只有900bp的cDNA?怎么保证获得全长呢？需要做RACE吗？

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优秀会员金话筒

沙发

发表于 2012-8-2 01:55 |只看该作者

要看你后续PCR的目的,如果只是检测目的基因的表达的话,随机引物是足够了;如果你要做cDNA的克隆就需要扩出全长了,这个时候用oligT就可以,如果目的基因太长,oligT的效率不够的话可以考虑用5'RACE.

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藤椅

发表于 2012-8-2 11:56 |只看该作者

你提到的假设是结果中的一种，在100bp处的上游和下游是等概率事情。所以能扩出全长基因。

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