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最近做实验,在细胞消化的过程中,发现自己对于其机理和反应的相关条件不是很清楚,上网查资料众说纷纭。主要是对于胰蛋白酶消化干细胞的过程,简单点说,就是用胰蛋白酶加入长满细胞的克氏瓶中(已提前吸取,弃掉培养液),来回摇动,使胰蛋白酶铺平培养面。是不是只要铺平了,细胞就在消化中,不用反复继续摇动?胰蛋白酶的消化能力有那么强吗?才0.25%啊。3 O. T! y( ^$ u5 S" o
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除此之外,中和消化许多人采用血清或者是HANKS‘液,其后也需来回摇动,使其与培养面均有所接触。对于血清和胰蛋白酶的比例,网上也各有说法,麻烦各位战友能不能说说各个说法的原因。反正我们是用10%。
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最后,对培养面先用混合液(胰蛋白酶和血清)对培养面进行吹打,后用PBS或者HANKS’液进行多次吹打,我是新手,对于吹打有些顾虑和疑问?忘战友指教。个人认为用混合液时,由于细胞已经被作用消化过了,随便吹几下就行,然后用PBS或者HANKS'液进行仔细吹打,对于吹打的次数和力度,还有时间总是掌握不好,时间长了,怕细胞损失多,力度大了怕细胞机械损失大。用一句话解释啊,哥成了一个矛盾体啊,晕。忘广大战友赐教。 |
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