脐带间充质冻存

湖南干细胞

养了批脐带间充质，打算冻存。请教那一代冻存好？是换液的时候冻存还是什么时候冻存？冻存液用哪个最好?20%FBS+10%DMSO+70%D/F12如何？请大家指教。谢谢。

daifenghao

我们一般都是传代完后收获细胞冻存，冻存配方6%DMSO+6%血清+培养液。事先配制好冻存液，以防当场配制，DMSO放热损伤细胞。复苏细胞，一般我们会用培养液洗涤两次。

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回复 猩猩 的帖子
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再次看了你的回复，请问PE手套是包住冻存管再放入水浴锅吗？

湖南干细胞

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回复 aiweieryezhi 的帖子
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因为在稀释时，用4℃稀释，那个温度DMSO对细胞的毒性比较小。常温下细胞毒性比较大。并且水浴融化后温度并未达到37℃。

流云阿凯

血清90%+10%DMSO的配方或者5:4：1比较好，复苏水浴最好也是无菌水，酒精檫拭。

aiweieryezhi

不管是继续培养还是直接发放，在换液时冻存的细胞都不好。最好是传代后冻存。冻存配方可以试一下，每家用的都不一样。细胞复苏时，水浴应该都可以，条件允许的话用去离子水，最好是用酒精擦一下冻存管。离心时培养基应该用室温的吧，细胞你已经37水浴了，你再加入4的培养基。不知是为什么。

湖南干细胞

回复 雁南飞 的帖子
  {1 Y1 ?! C, l* B& o! {2 Y: U
/ T" ]5 R$ w8 {谢谢你的意见。

雁南飞

楼主的配方应该是没问题的，DMSO可以降得更低一点,毕竟对细胞有毒性.
$ A4 C) g9 L6 F  M具体冻存哪一代,要看你复苏后需要再传多少代,一般来说,10代以内是稳定的,超出10代生长就不好了,所以冻存最好在五代之前.

老姜

回复 湖南干细胞 的帖子; U4 R) q3 w6 c# I7 i+ z5 s! N

, i9 m. s$ h+ V' _* [按照前人研究在程序冷冻仪冷冻细胞的标准是最初的1小时要每小时温度降几度，后面几小时温度又要每小时降几度，以达到细胞浆中基本没有冰晶形成导致戳伤细胞器。做实验是手工操作所以前人研究出不同温度降温，其目的一致。在-20度置1h后，还应置-80度过夜，次日直接放入液氮中，冷冻效果不错。

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关于冻存，先4℃放置1/2到1小时，可以促进DMSO在细胞毒性较小情况下渗入细胞起到保护作用，细胞内冰晶减少了，但是-20℃放置1-4h不等，DMSO也会变成固态，应该也会产生结晶，为什么没啥影响？