细胞制备操作SOP

guanjun1314

哪位大神有“细胞制备操作SOP”相关的资料提供参考不？叩谢！

plum

  |0 @8 n( ]+ t7 A( d

$ P! n! P/ f5 q% f# p这里有个CIK的，你参考一下。取之于民用之于民

yooung

6 q' k, X: f8 W$ ^# H8 C5 i* a$ b& }0 B" E5 y
回复 guanjun1314 的帖子6 r: e  f. S2 e' h. M
: \8 a, r- M" n$ w5 d, A8 t- h
细胞制备操作SOP？SOP要求非常细，不同的细胞的制备SOP肯定不一样，所以你应该说明是什么细胞的制备操作SOP。
) S% G( y: i  W  i1 b9 K5 f另附一份脐带间充质细胞的说明书，其中有部分可以用作SOP的内容。
4 {$ K' {" G9 D6 P( @5 b

guanjun1314

回复 yooung 的帖子& |0 n) `( C% W! H- ~

1 @! c  ~5 C  T3 x: {; k感谢提醒，我要的主要是针对CIK的，流程我们有，但SOP我真没有

yooung

回复 guanjun1314 的帖子4 r* i: H* ^, U6 I& C* s% C# p
9 J0 Y' n  I! r$ F* s
以前也写过一些SOP，我觉得SOP就是把流程细节化，把实际操作文字化，再加些注意事项，套上SOP通用的格式，就可以了。

guanjun1314

回复 yooung 的帖子  ]2 ]6 O6 N# N) X, Y) C( s+ o

) Z. x  z4 {0 L$ g" i嗯，建议得好，采纳

guanjun1314

回复 plum 的帖子  @. g" N+ V- g
/ ~6 {5 u% [- W+ m  ^6 z# A1 K
非常感谢

海南小石

; s" M; Y0 {! p9 P
$ {- ?7 r* b& e- G5 v* Z5 X: T
有一个相关的，希望对你有帮助% e) h( A. i0 e4 Y
一、目的) ~' Q- |8 v% r; s4 |
7 ]4 {1 ^# x7 J- s* }+ U1 A
MDCK细胞培养是分离流感病毒及相关研究实验的基本技术。疾控中心的所有技术人员，必须按照本文件相关的操作规程进行操作。
" U, F6 i4 Q& }3 P( D& x7 W
& Y4 a% Q& U5 }, j+ K& R! Z7 R二、适用范围& i" O+ w3 {2 p$ t) e  H8 L

' F9 o" m$ r3 F' c9 m, o' Y适用于疾控中心所有技术人员 。
+ T% }' b# T+ h  ]
! l, _* c; U! A) C, s三、程序
; y* @# v' t* Y: b+ r% g
; a! |/ o# b- b3 k1 H% j' c2 j（一）生物安全要求- T; L$ r9 h  I3 a! k

2 t+ |4 I9 t' W7 ]实验室生物安全级别：BSL-1
& B! d; B, B, x2 a. q5 ~7 z' h- `* {/ @) |! U2 z
所有操作必须在BSL-1实验室的生物安全柜里进行。/ E& A; p3 X! |$ Z: k$ T4 f
1 ]  h; A. U+ y$ y9 J: G4 _6 Y- b
（二）材料, N  {& {' ]! \& D  f
. Y+ l0 u  `* m: C9 _. w
1. 生长成片的MDCK细胞) G( v: W  P1 r0 E, G' r
/ Y  @  z' M5 A$ `3 z# l2 Y4 Q2 @
2. 无菌的T25细胞培养瓶0 \! T7 N9 C0 h; R% Y# r& p

& t; W0 d( N- G4 Y7 ^( Q) ?! y- {/ \3. D-MEM培养液（含有L-谷氨酰胺）  b  ~1 ~$ [' h1 Z% V) V: \

7 [: [; Z3 m* t4. 青、链霉素母液（10000 U/mL青霉素G；10000µg/mL硫酸链霉素），分装后保存于-20℃! g5 r# Y4 y4 U+ b) y6 m

9 ~9 Y9 s. R7 n% S% o% e/ B/ n. j$ |% k5. HEPES缓冲液，1M母液- p2 H8 A, k' l* U
/ a( L  y5 _# a1 B# v$ U
6. 胎牛血清
9 w# Z; F& _( r; A+ u
/ ?4 F- M; w% b( B2 J* Z8 V7. EDTA-胰酶（0.05%胰酶，0.53mM EDTA-4Na），分装后保存于-20℃9 Z  O  o5 ?; y- p' }

9 y: s6 a8 Q% R7 ^8. 7.5%牛血清白蛋白组分V3 y6 z- R( @7 y2 Y. Y

, D/ C1 ]( C) A9. 1mL、10mL无菌移液管" z5 B0 _$ V& B  x) {& {0 c8 q

- Q4 P& }5 J8 _- ~10. 70％～75％的酒精
/ |( t8 w" k5 B( D/ J9 K' M- w7 s+ v
注意事项：经常检查试剂使用的有效期。
+ A+ r: d5 i- y: E0 s" B& @* j4 T, l" I, p; g5 l0 I$ w
（三）实验步骤+ E4 D7 y3 Y. v" n' l- }9 P, Z9 W
" c& J5 S4 w# s, n6 i$ q
这里以T75细胞瓶的单层细胞培养为例，叙述MDCK细胞的培养程序。如果细胞瓶的规格有变，MDCK细胞悬液的量必须做相应的调整。
  a' x) q+ ~; X! J8 ]+ j! X" E: \1 z, L  U: K' s4 f
1. D-MEM培养液的准备9 ]6 f7 g, ]  M6 ?1 }- H( k+ Z" l; e

2 C8 i' f- q/ I+ P, @1 [8 ^) f500mL D-MEM液中加入：& s3 c& U1 r# ]
( l5 [$ O/ P, F. t! ?- r$ P8 [
青、链霉素母液5mL（终浓度达：100U/mL青霉素；100µg/mL链霉素），
* x5 Q- r8 c  |, |4 D* @7 X6 h
; a/ @' H" ]/ n: t) THEPES缓冲液12.5mL（终浓度：25mM）。
% y5 u- J2 z+ [/ o& L. D# C# @2 x2 i% D/ K" c3 }) l' h7 k8 t0 R
7.5%牛血清白蛋白组分Ⅴ 12.5mL
- P- [- c  ]! G1 H
  e/ Q) M2 R# N$ }2. 细胞生长液的准备4 V: L$ Q1 R* v0 W2 [1 I

1 \5 u- o# {/ U2 n' C) p胎牛血清10mL加到90mL的上述（1）的液体中，使胎牛血清的终浓度为10%。
# s9 V- P7 ~: S
# {. l, X4 q) I  y/ k3. 首先将细胞培养瓶中的培养液弃去，加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶。
" s; K# A  w. e8 }9 ~# M" H3 D  m! K1 T" M& f* ^( L' Q: J. T, {
4. 温和地摇动细胞瓶1min，使EDTA-胰酶均匀分布在整个细胞薄层。然后用移液管吸去EDTA胰酶。
9 I1 [, U1 Y) ?, `8 s( o  A3 J% |6 d$ _" }' M
5. 重新加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶重复上述步骤。1 n3 G3 }. j* M# H. n; U
: b; J+ M, P0 f& [, B7 j
6. 加入1mLEDTA-胰酶使其均匀分布在整个细胞薄层，37℃孵育细胞瓶直至细胞从塑料细胞瓶的表面分离（约5～10min）。必要时可以摇动或吹打来分离细胞。然后加入1mL胎牛血清灭活残余的胰酶。
7 ~! J) n) Z) a
7 ]+ ^3 e& f- H% |1 F, K0 \7. 加9mL已经配置好的含有L-谷氨酸的D-MEM培养液，轻轻用移动移液管来吹散细胞团。  Q1 Y7 c# O9 ?. }

/ J% V' p2 Y8 _4 L; I' X* V; Q8. 取10mL混合物加到90mL细胞生长液（细胞悬液的浓度大约为每毫升含105细胞）6 A9 G% `8 t- H  u) Q! |; j# O8 P
) T- K9 `- A% o/ _+ X$ G. i- ^) F- ^
9. 每个T25细胞培养瓶加入6mL（6×105/mL）细胞悬液，剩余的细胞悬液可以加到T75细胞瓶用于细胞传代。通常6mL细胞悬液2～3日可生长成片（80％～90％）的单层细胞。! f8 ^' z' K0 P2 \0 i! F: c* M+ j1 [
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10. 于37℃，5%CO2培养箱里培养细胞，每天观察细胞状态，以供进一步实验用。) A6 @: _+ f; u2 l) l7 Y+ `

xiaoxiaodeji

制备的sop根据实际操作流程规范化细化就好了，问一下，各位有没有实验室规范管理的相关文件

gyjjsw11333

为什么下载不了呢