细胞制备操作SOP

guanjun1314

哪位大神有“细胞制备操作SOP”相关的资料提供参考不？叩谢！

plum

# D0 R6 K  \' N- o1 G- ^; J
- N' @7 J9 @6 |. Q8 ]0 V这里有个CIK的，你参考一下。取之于民用之于民

yooung

5 ]' Z( O& O( Z0 ^3 ^; S- s

8 n5 u* }) G/ p) U回复 guanjun1314 的帖子
3 @( Y8 [' h9 x9 f* W$ Q$ `1 I
7 L! `8 g& _, n; Y7 Y* p细胞制备操作SOP？SOP要求非常细，不同的细胞的制备SOP肯定不一样，所以你应该说明是什么细胞的制备操作SOP。4 r2 k" n  e! m, o. w
另附一份脐带间充质细胞的说明书，其中有部分可以用作SOP的内容。, |4 \- g8 b) c+ J' C9 Z6 L* a5 L

guanjun1314

回复 yooung 的帖子$ D9 O- w$ X( Y1 J" ^: x
2 L8 r- e! l% {$ x
感谢提醒，我要的主要是针对CIK的，流程我们有，但SOP我真没有

yooung

回复 guanjun1314 的帖子# H! l! a/ P$ p7 x$ y4 d& c

9 z) x9 l" q0 x5 l. z3 z, B; d, @' A* |以前也写过一些SOP，我觉得SOP就是把流程细节化，把实际操作文字化，再加些注意事项，套上SOP通用的格式，就可以了。

guanjun1314

回复 yooung 的帖子
, w" u1 o$ B  B+ J9 v& u
2 L3 h% x( H- f$ {1 l0 H& H6 X嗯，建议得好，采纳

guanjun1314

回复 plum 的帖子
+ V7 K$ d$ k5 X$ R' c' L! U
  C- M+ K4 X# M* }非常感谢

海南小石

1 t) M. o% k, g

) S. U7 c, c2 s9 P有一个相关的，希望对你有帮助3 j3 T; j3 z- F% h) R& r
一、目的
1 K, X1 W* i  C1 ?
# g4 s" P& O% IMDCK细胞培养是分离流感病毒及相关研究实验的基本技术。疾控中心的所有技术人员，必须按照本文件相关的操作规程进行操作。
9 N5 Z* J9 L- R: x, I; R
; O8 B% \- m  i$ X9 g二、适用范围
: [- K# W0 @3 @. |, u, T2 y$ t8 u4 F
适用于疾控中心所有技术人员 。
$ Q7 ]  r/ q' [' f# N$ d( f
8 H# w7 P; L' Y$ E" l, y2 D$ ]三、程序) a% h* b. V) m" d- k6 n8 i
7 U  N7 F& g" _$ |7 J
（一）生物安全要求( o! h. V  _# x5 B. L; P

# g9 M% M6 y/ g# T; Q实验室生物安全级别：BSL-18 s9 W( r# q/ a4 V9 @2 a0 f

0 V$ Y7 X( G  O2 |/ e所有操作必须在BSL-1实验室的生物安全柜里进行。& I: B  X3 w' ?( u! O
& Q7 i( [: L0 o0 @
（二）材料) l' ^0 m- X0 E5 h5 C

, @* {# h3 Y( P0 W1. 生长成片的MDCK细胞
( c7 R  t) U+ |( s/ l
$ V' q6 Y7 X" j# t# `% {2. 无菌的T25细胞培养瓶
3 E9 T- z5 l& G) m
2 a/ R/ `. Z0 k( C3. D-MEM培养液（含有L-谷氨酰胺）* i3 t4 P$ r" S

* G" I6 [# f6 M' `4. 青、链霉素母液（10000 U/mL青霉素G；10000µg/mL硫酸链霉素），分装后保存于-20℃
, n& R" \, ^! m+ |# l7 d
* _: d" J* |- H5. HEPES缓冲液，1M母液
# I5 U5 Y, T1 ]( S, z9 S% |
: A1 t" [) z( G$ F$ G" _- t9 y6. 胎牛血清
& ^, b8 L9 v% C* R8 `+ O8 x2 B" M" v" h5 G
7. EDTA-胰酶（0.05%胰酶，0.53mM EDTA-4Na），分装后保存于-20℃
  W* G; `* l/ m* n; X* Y/ {
* E7 A8 m, C4 H8. 7.5%牛血清白蛋白组分V
. S  z' f) d7 `0 c# x3 d# A/ }6 A% Q4 Y: ~/ V/ N+ r' r
9. 1mL、10mL无菌移液管
2 c! |8 s( y: X5 E# F: K# Z. ~! o. }1 ^) \+ `
10. 70％～75％的酒精' {& U4 X2 ]2 D. U% A2 ^- I

( \* K( _: U; G+ I) K2 q注意事项：经常检查试剂使用的有效期。" {  g  Q4 w5 z3 S, l8 u

6 _9 G( ?6 c, I3 r( v（三）实验步骤- |1 s9 l: @% i  H2 ~5 t1 C

2 ?% J0 z" R* s- J这里以T75细胞瓶的单层细胞培养为例，叙述MDCK细胞的培养程序。如果细胞瓶的规格有变，MDCK细胞悬液的量必须做相应的调整。
( f( Z7 E% D8 z( ]; H8 ^" ]9 P
+ N$ H# m9 |0 l1 ?, U5 x4 o, g1. D-MEM培养液的准备7 V7 _' }% ~: Q, `6 c

4 n3 v) F' M* {" n! @500mL D-MEM液中加入：
. ^9 v/ l- R1 K' W, v
% [2 I: C8 ?- Y4 u- B) u2 y青、链霉素母液5mL（终浓度达：100U/mL青霉素；100µg/mL链霉素），
7 f# p2 F. a/ `- K, d* q4 d1 Y
1 D7 U4 I# m& U) UHEPES缓冲液12.5mL（终浓度：25mM）。- U: f1 U' b/ ^4 q. x! ], b. x) }

( K0 o* C- }! d5 J( {/ k7.5%牛血清白蛋白组分Ⅴ 12.5mL
$ [. c2 D8 m, D( w2 D% [  {- T
& I; c  k& M/ k& c2. 细胞生长液的准备
' L+ R  `5 d( `* Q4 T( L$ h
" k& a% Q  I" {8 s胎牛血清10mL加到90mL的上述（1）的液体中，使胎牛血清的终浓度为10%。
3 ^1 o6 G2 e/ i8 G: U  n+ q; P, {0 G& j5 S' x8 x& x
3. 首先将细胞培养瓶中的培养液弃去，加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶。
8 E# N: g7 U% B$ B& J% L( o2 ~9 P0 X% i2 s$ h( Y* l
4. 温和地摇动细胞瓶1min，使EDTA-胰酶均匀分布在整个细胞薄层。然后用移液管吸去EDTA胰酶。+ W- o0 @* A$ @* T) b1 e' r

* b& R8 I3 J1 i; @( L( C5. 重新加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶重复上述步骤。' Q6 k, ]" Q! N5 a0 Y
# z# A; ^: t+ U0 A5 i0 q" w# ~
6. 加入1mLEDTA-胰酶使其均匀分布在整个细胞薄层，37℃孵育细胞瓶直至细胞从塑料细胞瓶的表面分离（约5～10min）。必要时可以摇动或吹打来分离细胞。然后加入1mL胎牛血清灭活残余的胰酶。
0 H- q  t& L9 Q- k! f( B5 _+ g
; S( v: l$ M$ g  F3 K' V9 G# X4 p7. 加9mL已经配置好的含有L-谷氨酸的D-MEM培养液，轻轻用移动移液管来吹散细胞团。  \) b0 q1 ?% i$ n% i1 j
' G8 M" x, S! \0 P* i
8. 取10mL混合物加到90mL细胞生长液（细胞悬液的浓度大约为每毫升含105细胞）% K+ S2 w+ Z8 a% E# Y6 W2 A3 T) M
' f6 I8 T! z0 Z8 {3 f9 t
9. 每个T25细胞培养瓶加入6mL（6×105/mL）细胞悬液，剩余的细胞悬液可以加到T75细胞瓶用于细胞传代。通常6mL细胞悬液2～3日可生长成片（80％～90％）的单层细胞。  R. `/ w2 q, F/ r

2 n" L6 y4 H4 S0 }) f10. 于37℃，5%CO2培养箱里培养细胞，每天观察细胞状态，以供进一步实验用。8 I: M. u+ N: K' C& ?4 a

xiaoxiaodeji

制备的sop根据实际操作流程规范化细化就好了，问一下，各位有没有实验室规范管理的相关文件

gyjjsw11333

为什么下载不了呢