细胞制备操作SOP

guanjun1314

哪位大神有“细胞制备操作SOP”相关的资料提供参考不？叩谢！

plum

9 W! Q. x1 e9 f7 s, q' r
% [; {8 }: _# s8 {) Z9 }; B1 {这里有个CIK的，你参考一下。取之于民用之于民

yooung

5 E* U6 F4 X5 c
2 n5 Q/ L  H1 U: I! Z+ @回复 guanjun1314 的帖子# Y; p$ w/ ?5 W) [

+ l; N. E+ D( t# N. S" ~细胞制备操作SOP？SOP要求非常细，不同的细胞的制备SOP肯定不一样，所以你应该说明是什么细胞的制备操作SOP。
6 v1 d- K) i% u9 L' p, T另附一份脐带间充质细胞的说明书，其中有部分可以用作SOP的内容。4 e- \  ^# t0 S9 C

guanjun1314

回复 yooung 的帖子
+ x' a6 n+ ^! s! i+ O$ P* Z4 {2 w+ l9 T' l. K/ o
感谢提醒，我要的主要是针对CIK的，流程我们有，但SOP我真没有

yooung

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. ~( ^# ~' n  `5 K# V6 ^7 W* w7 c8 }9 i$ S5 E
以前也写过一些SOP，我觉得SOP就是把流程细节化，把实际操作文字化，再加些注意事项，套上SOP通用的格式，就可以了。

guanjun1314

回复 yooung 的帖子4 p" ?- }3 k) x0 v2 ?

: n6 t6 t6 w4 ^: |( ^$ O* a: C, m5 V嗯，建议得好，采纳

guanjun1314

回复 plum 的帖子, T: p- o$ S( G+ W; ^* L

5 s7 g6 @2 I/ m! R) _非常感谢

海南小石

$ h4 u& T0 }$ o1 o* N) M5 j; M
& I) ?3 M- I$ N/ L
有一个相关的，希望对你有帮助6 M" z9 n7 e: [  w: ?
一、目的
4 T/ ^. F( K4 G1 {3 F0 ^) V* }  v' E7 N' D' W
MDCK细胞培养是分离流感病毒及相关研究实验的基本技术。疾控中心的所有技术人员，必须按照本文件相关的操作规程进行操作。
& @4 u' s! G( t% `- J& c2 L) P7 q" O) P. s! r8 B7 B
二、适用范围
: L# M9 [+ w+ r
; e* r% `- U, Z2 l) _适用于疾控中心所有技术人员 。
* ^! i" c6 Y! |+ p. [# F8 Z7 a/ @
三、程序
  j& u- B, w( L
7 r5 C" r' s/ u（一）生物安全要求  n2 X( X- w& _/ P  k5 V, y& f' B

$ M( w/ n# p8 d+ P7 U' F4 p% m实验室生物安全级别：BSL-1) X5 ~9 R3 ]) E9 P- A
2 \" R( G2 |( Q& h! B( s
所有操作必须在BSL-1实验室的生物安全柜里进行。$ G- d# v- D* _4 v. I
0 B6 ^2 x. B# b
（二）材料7 j) g  V, D4 D# c

9 F0 n7 g  s7 ~  B2 j4 v5 k1. 生长成片的MDCK细胞
. c. e  @& e! q/ ?: l- {
  \- F  ^& d$ T5 @& R& f* [0 C2. 无菌的T25细胞培养瓶! w3 l! |: P- x0 |

3 a" N% y3 I& F& i& r. ?8 ~3. D-MEM培养液（含有L-谷氨酰胺）5 i/ a- ]$ S8 j/ g" V  t

5 a* G# z( f9 d6 b' k  R# a1 B/ |* y4. 青、链霉素母液（10000 U/mL青霉素G；10000µg/mL硫酸链霉素），分装后保存于-20℃% K: _4 i' Y, Q3 t  k

  L" s9 e9 B  ?: y3 N# x5. HEPES缓冲液，1M母液
) K* N. V0 c$ i2 B
4 K/ u3 W3 p* U9 `. p9 x6. 胎牛血清
- T& u# ]" \/ K: Z( R7 A  I$ W- [; f. Z
7. EDTA-胰酶（0.05%胰酶，0.53mM EDTA-4Na），分装后保存于-20℃+ v' _) I  f. ], _* |  l+ U' d

) m" ]4 h3 y3 @0 z. q8. 7.5%牛血清白蛋白组分V
) E7 V- c  C6 P& Q) V' n! v% b$ \# T9 X
9. 1mL、10mL无菌移液管
3 y- g  q+ x& f- }5 ~+ u& W! W
4 k5 c- m. h! L10. 70％～75％的酒精
; f3 h1 X) K" V8 h9 s6 C$ N
/ H% @. w/ p: G2 R" O* y注意事项：经常检查试剂使用的有效期。2 h5 O6 d/ c7 e- H- S+ v
' Y, s$ A" z$ I" v9 d3 c( G4 I0 q
（三）实验步骤
% L3 M7 W& ~$ b; F3 n: d) |2 k/ F6 t3 K2 \* K" i
这里以T75细胞瓶的单层细胞培养为例，叙述MDCK细胞的培养程序。如果细胞瓶的规格有变，MDCK细胞悬液的量必须做相应的调整。$ J+ ]0 `8 h$ {2 F* }0 e2 Y
5 A4 }6 W$ ~3 q0 r  O% t
1. D-MEM培养液的准备. q, p! p7 K' x$ b. A6 z! h
8 z8 o- O- a8 ]- b
500mL D-MEM液中加入：/ k6 H; ^5 ?7 E. T2 W3 [8 ~
0 [: {# D% R+ C! k
青、链霉素母液5mL（终浓度达：100U/mL青霉素；100µg/mL链霉素），' k/ {  w7 @7 ^. e2 i6 C2 S

1 M; j: ^* H9 Q; l" THEPES缓冲液12.5mL（终浓度：25mM）。9 E7 x. p: V/ k: j
% f+ _7 C) s4 Z1 K- N* c2 x# F
7.5%牛血清白蛋白组分Ⅴ 12.5mL ; d$ {  H- l1 @7 F, Q9 K4 p; y! E
7 k5 g: n% M" Y) D2 X. ~
2. 细胞生长液的准备
3 ^1 z* X+ ~: @+ H2 E* K5 Y: m* u% U( {9 o0 I  p! S9 |
胎牛血清10mL加到90mL的上述（1）的液体中，使胎牛血清的终浓度为10%。* p+ @# J* M1 {8 p' n) R+ {5 {8 |
+ a: ]8 Z9 W% B; B' q% |# }0 j
3. 首先将细胞培养瓶中的培养液弃去，加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶。/ f4 z% f+ e) D1 n1 _/ A2 Y% Q9 v
* _; \% W* Y/ P7 J. S
4. 温和地摇动细胞瓶1min，使EDTA-胰酶均匀分布在整个细胞薄层。然后用移液管吸去EDTA胰酶。) s. j3 i0 E5 B, c) u* ^6 U
  u3 U4 q9 Z1 _
5. 重新加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶重复上述步骤。9 S! u; d5 E1 `8 v! t
  G- R- G& o3 p+ [
6. 加入1mLEDTA-胰酶使其均匀分布在整个细胞薄层，37℃孵育细胞瓶直至细胞从塑料细胞瓶的表面分离（约5～10min）。必要时可以摇动或吹打来分离细胞。然后加入1mL胎牛血清灭活残余的胰酶。1 U& V; S9 f' S% s6 K8 h

$ E0 s0 P/ H5 E" |0 O7. 加9mL已经配置好的含有L-谷氨酸的D-MEM培养液，轻轻用移动移液管来吹散细胞团。) w; E4 i% ~" m1 Z
. J6 m& M* `4 j' \; E7 Q- h
8. 取10mL混合物加到90mL细胞生长液（细胞悬液的浓度大约为每毫升含105细胞）- n$ ?4 o+ b" B4 q

: B2 f3 g/ K$ g0 ^: O) O9. 每个T25细胞培养瓶加入6mL（6×105/mL）细胞悬液，剩余的细胞悬液可以加到T75细胞瓶用于细胞传代。通常6mL细胞悬液2～3日可生长成片（80％～90％）的单层细胞。
+ A& [& }5 x3 g7 ^  Y1 p; Q. B6 Q- C6 y7 Q* D5 P9 r
10. 于37℃，5%CO2培养箱里培养细胞，每天观察细胞状态，以供进一步实验用。" W) T6 h5 v5 w( c; T7 H" s  X2 S

xiaoxiaodeji

制备的sop根据实际操作流程规范化细化就好了，问一下，各位有没有实验室规范管理的相关文件

gyjjsw11333

为什么下载不了呢