细胞中蛋白质提取

冰枫de梦

我用的TRIzol法提取细胞中的RNA,加氯仿离心后分层，RNA主要溶解在水相中，那么蛋白质是不是溶解在有机相中，怎么提取有机相中的蛋白质？求高手指点

rain2402

你是想一次提取又得RNA又得蛋白嘛？       这样提取RNA时的蛋白是变性之后的，很可能发生了剪切作用，一般没有用的了吧？

xbqian

楼上的说得有理，要想核酸和蛋白一起提取，好像难度蛮大的。要是谁能搞定倒是一个蛮大的突破奥。

冰枫de梦

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( S0 j8 `3 c7 X3 I: N哦，这个样子啊，受教了，呵呵

mayansen1314

偶也有过这样的想法呢，不过没试。那trizol法能把DNA跟RNA一起提了么？

mayansen1314

回复 rain2402 的帖子5 p: k9 e: U" p7 ^3 u' ]

6 R0 c# R/ [' E$ p& Z' Y偶也有过这样的想法呢，不过没试。那trizol法能把DNA跟RNA一起提了么？

冰枫de梦

回复 mayansen1314 的帖子+ s$ f/ U8 a; W6 v% F2 k: E
, A$ E# q3 J, ^3 X
请问你的细胞中蛋白如何提取的，有详细步骤吗，谢谢了

绿雪

细胞总蛋白的就很简单了，加裂解液裂解细胞就可以了；如果是膜蛋白、胞浆或者核蛋白的话，也有专门的试剂盒可以购买。

冰枫de梦

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不太清楚，看资料说加氯仿离心后分三层：RNA（上层）、DNA（中层）、蛋白质（下层）

LQAI2012

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$ J5 z4 b0 O8 a( N, n2 a- ]2 s
; y0 @  _4 W1 h用trizo提取，DNA和RNA只是分离在不同的液面层上了，应该是可以分开吸取出来，然后再用不同的溶剂沉淀就可以的~
* [' o  k+ M6 _RNA在上层的水相层中，吸取后用异丙醇沉淀
$ Z; ~9 R( g4 l7 @3 G  ADNA在中间层和黄色有机相层中，用乙醇沉淀