细胞中蛋白质提取

冰枫de梦

我用的TRIzol法提取细胞中的RNA,加氯仿离心后分层，RNA主要溶解在水相中，那么蛋白质是不是溶解在有机相中，怎么提取有机相中的蛋白质？求高手指点

rain2402

你是想一次提取又得RNA又得蛋白嘛？       这样提取RNA时的蛋白是变性之后的，很可能发生了剪切作用，一般没有用的了吧？

xbqian

楼上的说得有理，要想核酸和蛋白一起提取，好像难度蛮大的。要是谁能搞定倒是一个蛮大的突破奥。

冰枫de梦

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' q# J3 l/ X/ f  y, u
" M3 U5 Z( x. |+ i哦，这个样子啊，受教了，呵呵

mayansen1314

偶也有过这样的想法呢，不过没试。那trizol法能把DNA跟RNA一起提了么？

mayansen1314

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8 S  Y. y' n2 u4 a4 Q+ _; A
6 {# o( |( O+ t偶也有过这样的想法呢，不过没试。那trizol法能把DNA跟RNA一起提了么？

冰枫de梦

回复 mayansen1314 的帖子/ c  G% o+ N! w7 E
! T: M% `6 }6 s2 B  p3 T
请问你的细胞中蛋白如何提取的，有详细步骤吗，谢谢了

绿雪

细胞总蛋白的就很简单了，加裂解液裂解细胞就可以了；如果是膜蛋白、胞浆或者核蛋白的话，也有专门的试剂盒可以购买。

冰枫de梦

回复 mayansen1314 的帖子. _- d9 r3 g/ p( B7 }! B. L
( S- h. l$ J9 P8 p1 x: }1 @: v" N
不太清楚，看资料说加氯仿离心后分三层：RNA（上层）、DNA（中层）、蛋白质（下层）

LQAI2012

回复 mayansen1314 的帖子8 L# ?9 D4 H3 F" F4 o, O; v

, C/ `9 P4 N; U8 L8 q用trizo提取，DNA和RNA只是分离在不同的液面层上了，应该是可以分开吸取出来，然后再用不同的溶剂沉淀就可以的~
! v7 X* e7 Z. p& }( pRNA在上层的水相层中，吸取后用异丙醇沉淀
, P4 {0 P0 N5 k" h4 mDNA在中间层和黄色有机相层中，用乙醇沉淀