细胞中蛋白质提取

冰枫de梦

我用的TRIzol法提取细胞中的RNA,加氯仿离心后分层，RNA主要溶解在水相中，那么蛋白质是不是溶解在有机相中，怎么提取有机相中的蛋白质？求高手指点

rain2402

你是想一次提取又得RNA又得蛋白嘛？       这样提取RNA时的蛋白是变性之后的，很可能发生了剪切作用，一般没有用的了吧？

xbqian

楼上的说得有理，要想核酸和蛋白一起提取，好像难度蛮大的。要是谁能搞定倒是一个蛮大的突破奥。

冰枫de梦

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% a) \( ^0 {# P9 C# [( E& G  G哦，这个样子啊，受教了，呵呵

mayansen1314

偶也有过这样的想法呢，不过没试。那trizol法能把DNA跟RNA一起提了么？

mayansen1314

回复 rain2402 的帖子0 D  ]% K% t' r) a; G" E3 [

0 x; [- e" b$ b2 E偶也有过这样的想法呢，不过没试。那trizol法能把DNA跟RNA一起提了么？

冰枫de梦

回复 mayansen1314 的帖子( f" P0 k/ x# ~6 y
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请问你的细胞中蛋白如何提取的，有详细步骤吗，谢谢了

绿雪

细胞总蛋白的就很简单了，加裂解液裂解细胞就可以了；如果是膜蛋白、胞浆或者核蛋白的话，也有专门的试剂盒可以购买。

冰枫de梦

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' b8 u  R9 h: s0 [- A8 P: ^! z5 F$ `  Q) q% J" w1 {  f
不太清楚，看资料说加氯仿离心后分三层：RNA（上层）、DNA（中层）、蛋白质（下层）

LQAI2012

回复 mayansen1314 的帖子7 t/ p3 [& x7 \; `  {

" ?; B' B1 i" u! @用trizo提取，DNA和RNA只是分离在不同的液面层上了，应该是可以分开吸取出来，然后再用不同的溶剂沉淀就可以的~" J4 ?- P/ E. I: q4 ~/ G, F
RNA在上层的水相层中，吸取后用异丙醇沉淀
4 S2 x: k# @# CDNA在中间层和黄色有机相层中，用乙醇沉淀