成软骨诱导阿利新蓝染色

huajie881026

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前些日子自己试着做了成软骨诱导分化，5天左右细胞成一团，随着时间慢慢变大，诱导至满28天，细胞团直径约达2mm，团块较白，感觉上是诱导成功了。昨天石蜡包埋，然后切片、脱蜡、脱水后，阿利新蓝染色30min后，拍了照片（如下图），一些疑惑请教做过成软骨诱导的大侠：
. w/ h" `& \/ V  x1、切片是不是厚了？昨天切的时候设置的是5um，但切下来的时候感觉厚了，有些地方有重叠；
' m( j: R& u; t- @* o$ A2 {! }2、阿利新蓝染的是粘多糖，应该是在外周部分还是中间部分？
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tjbone

阿利新蓝染可以染软骨基质，但不知你用的是标准阿利新蓝染PH2.5还是PH4.5，PH值不同染的酸性物质不同。, _7 Q0 \3 i* m- V, h# o6 ^0 }
软骨含有硫酸软骨素，同时在软骨基质中含有氨基聚糖，也可以用翻红O或甲苯氨蓝染色。

huajie881026

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: A  k/ a' Q# s6 z1 I5 M9 `4 l  D请教包埋前细胞团需要脱水吗？感觉没有脱水的的话，石蜡没有将细胞团很好包住导致切片不好切。

tjbone

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* x6 r. Q- {  w一定要按要求先固定，再由低浓度酒精开始到高浓度脱水，二甲苯透明、浸蜡、包埋才行！！！

huajie881026

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嗯  受教了。。。非常感谢！

tutufei

回复 huajie881026 的帖子' h( R# ~5 k2 w$ @. U) J1 i
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请问你诱导的软骨团长得快吗，这么小的软骨怎么做石蜡切片啊？我诱导的不怎么长啊，形成的圆球，直径才1mm多

huajie881026

回复 tutufei 的帖子3 }6 x  b& E0 {* \4 M4 q# M: j
* f) {- E+ x0 @+ w
可能细胞状态不好导致团块长得慢
, N! d0 I! R' Q石蜡切片我也做的不是很好，可以试试冰冻切片

tutufei

楼主，你这个图是染完色直接拍的是吗？还没脱水透明封片吧？有用甲苯胺蓝染过吗？

644414915

细胞爬片用的是什么包被的玻片 是赖氨酸吗还是明胶啊？

细胞海洋

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否则他会看不到
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