成软骨诱导阿利新蓝染色

huajie881026

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前些日子自己试着做了成软骨诱导分化，5天左右细胞成一团，随着时间慢慢变大，诱导至满28天，细胞团直径约达2mm，团块较白，感觉上是诱导成功了。昨天石蜡包埋，然后切片、脱蜡、脱水后，阿利新蓝染色30min后，拍了照片（如下图），一些疑惑请教做过成软骨诱导的大侠：# m' n8 l5 h' y6 o/ c
1、切片是不是厚了？昨天切的时候设置的是5um，但切下来的时候感觉厚了，有些地方有重叠；# L" w8 s" o2 W
2、阿利新蓝染的是粘多糖，应该是在外周部分还是中间部分？
- M& _$ i! W# }' ~* U" w. Y9 x3 w100×. `8 G: g* S6 N3 D

3 E4 D+ {) @" M+ M200×; H" B' g1 |# {( L& d7 c

tjbone

阿利新蓝染可以染软骨基质，但不知你用的是标准阿利新蓝染PH2.5还是PH4.5，PH值不同染的酸性物质不同。
7 Q" K0 n# F, y7 L软骨含有硫酸软骨素，同时在软骨基质中含有氨基聚糖，也可以用翻红O或甲苯氨蓝染色。

huajie881026

回复 tjbone 的帖子2 ?9 s- n2 E0 `4 k3 ~

$ u: {8 i/ e- h) J) h$ u请教包埋前细胞团需要脱水吗？感觉没有脱水的的话，石蜡没有将细胞团很好包住导致切片不好切。

tjbone

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" T1 p5 Z+ L0 w% w! m+ w一定要按要求先固定，再由低浓度酒精开始到高浓度脱水，二甲苯透明、浸蜡、包埋才行！！！

huajie881026

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. j+ D0 ~; N7 T: O$ G- ?5 P& ~" c) H  ]$ [; u8 k5 J7 L
嗯  受教了。。。非常感谢！

tutufei

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2 q* p1 a$ H2 u! \/ D" x2 C
9 C1 i' ]9 L6 E3 [% v0 A请问你诱导的软骨团长得快吗，这么小的软骨怎么做石蜡切片啊？我诱导的不怎么长啊，形成的圆球，直径才1mm多

huajie881026

回复 tutufei 的帖子! U, b0 G$ E% p2 |' ]' K) U
% ~' o: y. p; ~. Y, n
可能细胞状态不好导致团块长得慢
( L' c0 S6 E7 ^石蜡切片我也做的不是很好，可以试试冰冻切片

tutufei

楼主，你这个图是染完色直接拍的是吗？还没脱水透明封片吧？有用甲苯胺蓝染过吗？

644414915

细胞爬片用的是什么包被的玻片 是赖氨酸吗还是明胶啊？

细胞海洋

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, L& F. Z9 U( t* u2 M+ ~否则他会看不到" J& L! y! A8 ^/ y, E- M' k' U