成软骨诱导阿利新蓝染色

huajie881026

4 G+ x9 C6 j4 E0 r$ [0 S
& P+ K- a' M; J前些日子自己试着做了成软骨诱导分化，5天左右细胞成一团，随着时间慢慢变大，诱导至满28天，细胞团直径约达2mm，团块较白，感觉上是诱导成功了。昨天石蜡包埋，然后切片、脱蜡、脱水后，阿利新蓝染色30min后，拍了照片（如下图），一些疑惑请教做过成软骨诱导的大侠：
$ |& H" j% D0 g# o1、切片是不是厚了？昨天切的时候设置的是5um，但切下来的时候感觉厚了，有些地方有重叠；
8 |) g1 l9 o% }1 c' {2 o' b2、阿利新蓝染的是粘多糖，应该是在外周部分还是中间部分？
, a6 ~' N. j9 v# S- G8 U100×' a6 G' l/ e8 w: J. M9 [
% U$ Y3 l. P1 V
200×8 x$ e5 h' B" h! ^4 _7 g

tjbone

阿利新蓝染可以染软骨基质，但不知你用的是标准阿利新蓝染PH2.5还是PH4.5，PH值不同染的酸性物质不同。, ]! y6 v9 h- w- L9 B
软骨含有硫酸软骨素，同时在软骨基质中含有氨基聚糖，也可以用翻红O或甲苯氨蓝染色。

huajie881026

回复 tjbone 的帖子
; `! S  b9 X9 ~( a7 p; }8 @9 k' b( Q) u" _2 ?
请教包埋前细胞团需要脱水吗？感觉没有脱水的的话，石蜡没有将细胞团很好包住导致切片不好切。

tjbone

- p) d' m; T9 e  r
4 a9 e8 f. D% M4 w
一定要按要求先固定，再由低浓度酒精开始到高浓度脱水，二甲苯透明、浸蜡、包埋才行！！！

huajie881026

回复 tjbone 的帖子* X- b# [! G4 I5 ?, _; f, h; B

1 }$ }1 q) X7 o* a嗯  受教了。。。非常感谢！

tutufei

回复 huajie881026 的帖子
- }5 l  K) }, L( f$ t3 j% P6 \& j9 X% _& K; R7 c0 O" k
请问你诱导的软骨团长得快吗，这么小的软骨怎么做石蜡切片啊？我诱导的不怎么长啊，形成的圆球，直径才1mm多

huajie881026

回复 tutufei 的帖子; ?5 D& m: D4 A, L1 z% J$ v
* R1 z: l6 V( d
可能细胞状态不好导致团块长得慢
+ J1 j: J" U7 R9 T石蜡切片我也做的不是很好，可以试试冰冻切片

tutufei

楼主，你这个图是染完色直接拍的是吗？还没脱水透明封片吧？有用甲苯胺蓝染过吗？

644414915

细胞爬片用的是什么包被的玻片 是赖氨酸吗还是明胶啊？

细胞海洋

你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样8 _" h3 K8 _2 Z$ w& Z5 ~. M) S

- a, R1 c: C' v# }# \" Z+ s8 C% c否则他会看不到3 h0 {' B6 L( A  @