成软骨诱导阿利新蓝染色

huajie881026

, k. ]& X+ u+ i
# A. {/ B+ k1 ^; U' J前些日子自己试着做了成软骨诱导分化，5天左右细胞成一团，随着时间慢慢变大，诱导至满28天，细胞团直径约达2mm，团块较白，感觉上是诱导成功了。昨天石蜡包埋，然后切片、脱蜡、脱水后，阿利新蓝染色30min后，拍了照片（如下图），一些疑惑请教做过成软骨诱导的大侠：
# M8 l: N' Y8 E" G1 K, Q5 F1、切片是不是厚了？昨天切的时候设置的是5um，但切下来的时候感觉厚了，有些地方有重叠；3 b; C  b/ |- z5 u
2、阿利新蓝染的是粘多糖，应该是在外周部分还是中间部分？
1 }. L4 h1 H5 g0 w( j2 ^100×# ?& d8 w: u, \* g- a
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tjbone

阿利新蓝染可以染软骨基质，但不知你用的是标准阿利新蓝染PH2.5还是PH4.5，PH值不同染的酸性物质不同。
1 s7 T: b, h* J# p+ K  t软骨含有硫酸软骨素，同时在软骨基质中含有氨基聚糖，也可以用翻红O或甲苯氨蓝染色。

huajie881026

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* _0 P" R: c+ e& u5 \3 r6 C. v& D( C8 c3 [* M
请教包埋前细胞团需要脱水吗？感觉没有脱水的的话，石蜡没有将细胞团很好包住导致切片不好切。

tjbone

6 ^! t7 B# l5 a- A
. g' G" H# O# D# n一定要按要求先固定，再由低浓度酒精开始到高浓度脱水，二甲苯透明、浸蜡、包埋才行！！！

huajie881026

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* g1 {5 n/ k; {* u
: B3 F. N0 v5 c* `. t9 z7 i嗯  受教了。。。非常感谢！

tutufei

回复 huajie881026 的帖子9 Z* ^# w: X3 G' U  r

, M3 R! J6 d  E+ u请问你诱导的软骨团长得快吗，这么小的软骨怎么做石蜡切片啊？我诱导的不怎么长啊，形成的圆球，直径才1mm多

huajie881026

回复 tutufei 的帖子! I: v- {, E5 j! f. L5 X) B0 N

$ ?( t9 ], |. p  k: j" b可能细胞状态不好导致团块长得慢% E7 s2 q$ q0 A% H9 P9 A7 x
石蜡切片我也做的不是很好，可以试试冰冻切片

tutufei

楼主，你这个图是染完色直接拍的是吗？还没脱水透明封片吧？有用甲苯胺蓝染过吗？

644414915

细胞爬片用的是什么包被的玻片 是赖氨酸吗还是明胶啊？

细胞海洋

你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样+ T1 @, _/ o5 [' }' }* J- k( P, P

& n8 q: q4 h0 y否则他会看不到! r' j8 h1 N7 c' g& I+ f