用1.073的percoll分离兔子骨髓MSC，求助配置1.073g/ml的GE公司percoll的具体方法？

ytumuyangren

因全骨髓培养获取兔子骨髓MSC存在一定的弊端，因此在实验过程中想采用密度梯度离心的方式来分离MSC，看到有关兔子MSC分离所采用的percoll的密度梯度是1.073g/ml，查阅了一些配制1.073g/mlde percoll的资料，有不同的解释。
8 k' C5 e! m5 z+ p1 B1 `7 }0 k方法一：0 Q+ H+ A) [) @* j. }
1.先用9份Percoll与1份8.5％ NaCl或1.5M PBS混合达到生理性渗透压；
4 P' p, N- _$ v% X% C3 p5 C2.然后用生理溶液(0.85％ NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度：56体积percoll：44体积NaCL或PBS。
9 V! p; e" l( E& o/ Z. m方法二：
2 Z5 L, G! F9 e1 o0 a: ]9ml percoll原液+1ml8.5%的NaCl=工作液
. c4 s1 A9 V8 F# s# J10ml工作液+7.9ml 生理盐水=1.073的percoll
$ h% L6 n; v, K特此请教各位大侠，帮忙解决一下，不胜感激。

pengxuleo

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9 h  c9 ~9 Q  p9 U1 J" w
0 E' u: x; v4 O# Q( Z/ y' i你说的挺清楚的，按照你写的配置就可以了，两个方法都可行。一般情况下都是用10XPBS配成90%的母液，然后在做梯度离心前，用1xPBS或者生理盐水或者基础培养基配到你所需要的密度，在室温下进行梯度离心。

ytumuyangren

回复 pengxuleo 的帖子. c& @2 y6 H$ c+ R

# p8 t7 T. C1 y" Q嗯，谢谢pengxuleo的指点，今天试了一把，看到了传说中的雨雾层，分离后洗了一遍离心接种到T25的培养瓶中，明天看看效果，呵呵，希望能够成功。另外，我今天下了一份GE公司的percoll配制说明，讲解的还比较详细，里面有具体的公式。改天传上来给大家分享一下。

pengxuleo

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& S; C5 K3 N7 |$ Q9 E" i% h% N
; u0 }1 a% v) Y, y呵呵，祝你成功

644414915

我们没分离，也养出来了，长得贼快不到两天就要传代
6 j* y; w5 d4 J

644414915

但是现在让小鼠间充质干细胞把我给难道了，谁要是能养出来，我真服了

ytumuyangren

回复 644414915 的帖子4 \  a& a& q& x

" Y5 j1 \6 w( M4 H8 O那你们养出来的细胞有没有鉴定？

ytumuyangren

最近一直忙的做实验，没有及时更新实验的最新进展，元旦前后又做了几次，都能分出单核细胞，但是分出的细胞长的太慢，呵呵，还没有达到消化传代的要求，再养养，等细胞传到p3以后再做做鉴定。

644414915

回复 ytumuyangren 的帖子) h- [& ]! M- _5 {
0 h! L" ?# C) v9 U, X( p2 C
鉴定了，因为鉴定有神经方面mark表达，然后一个老师看了后把我细胞扔掉了；后来转做小鼠了。

644414915

, l  j# l1 V0 q

) n+ T; ]' Z( |% j% ]回复 ytumuyangren 的帖子
7 }3 S4 [+ J% p) a+ V, I5 ~& a/ f, q
- {  F+ z) w8 p关键这**吧实验简单结果居为己有，因为在人家地盘做实验所以只能低三下四的，不了了之了。