用1.073的percoll分离兔子骨髓MSC，求助配置1.073g/ml的GE公司percoll的具体方法？

ytumuyangren

因全骨髓培养获取兔子骨髓MSC存在一定的弊端，因此在实验过程中想采用密度梯度离心的方式来分离MSC，看到有关兔子MSC分离所采用的percoll的密度梯度是1.073g/ml，查阅了一些配制1.073g/mlde percoll的资料，有不同的解释。
1 U% d: a& i/ a3 z* q( {4 e方法一：! x! X( D- f& g/ Q: `9 S
1.先用9份Percoll与1份8.5％ NaCl或1.5M PBS混合达到生理性渗透压；1 _% ]3 k) p9 x8 G7 C( s
2.然后用生理溶液(0.85％ NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度：56体积percoll：44体积NaCL或PBS。- i% w9 k3 J0 _0 N. H& U; k
方法二：$ \  H: a7 R1 n% f
9ml percoll原液+1ml8.5%的NaCl=工作液
3 c/ _% ^5 k& X10ml工作液+7.9ml 生理盐水=1.073的percoll
$ \$ V" W4 ?7 P1 \特此请教各位大侠，帮忙解决一下，不胜感激。

pengxuleo

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* a8 k7 \2 J; w: G5 h$ }5 X0 V/ n+ H. B
3 D- i2 Z4 O' P6 i- X* g( C- r你说的挺清楚的，按照你写的配置就可以了，两个方法都可行。一般情况下都是用10XPBS配成90%的母液，然后在做梯度离心前，用1xPBS或者生理盐水或者基础培养基配到你所需要的密度，在室温下进行梯度离心。

ytumuyangren

回复 pengxuleo 的帖子- O6 z2 f3 D4 s4 s  Q& L3 F
& O4 y8 u9 }; A4 K
嗯，谢谢pengxuleo的指点，今天试了一把，看到了传说中的雨雾层，分离后洗了一遍离心接种到T25的培养瓶中，明天看看效果，呵呵，希望能够成功。另外，我今天下了一份GE公司的percoll配制说明，讲解的还比较详细，里面有具体的公式。改天传上来给大家分享一下。

pengxuleo

回复 ytumuyangren 的帖子& c/ A+ m2 F/ T  ^- o, g
3 E! h0 @7 ^/ ]- R. P
呵呵，祝你成功

644414915

我们没分离，也养出来了，长得贼快不到两天就要传代$ @8 ]( I: u" N. k6 h

644414915

但是现在让小鼠间充质干细胞把我给难道了，谁要是能养出来，我真服了

ytumuyangren

回复 644414915 的帖子$ K6 Z6 b8 A  v

  K+ r  c2 G' Q" [- @' v那你们养出来的细胞有没有鉴定？

ytumuyangren

最近一直忙的做实验，没有及时更新实验的最新进展，元旦前后又做了几次，都能分出单核细胞，但是分出的细胞长的太慢，呵呵，还没有达到消化传代的要求，再养养，等细胞传到p3以后再做做鉴定。

644414915

回复 ytumuyangren 的帖子
: W; I$ t7 |4 x( S2 z% N( J" Z
1 d  X7 ~8 V4 s! T( H5 d鉴定了，因为鉴定有神经方面mark表达，然后一个老师看了后把我细胞扔掉了；后来转做小鼠了。

644414915

7 ?" l, h, d; D4 a

& x. c* n3 L1 b8 b' T( A回复 ytumuyangren 的帖子6 Q1 i0 ?! s) Y  n- o5 C. O# Z

, [4 V. p* ]9 W关键这**吧实验简单结果居为己有，因为在人家地盘做实验所以只能低三下四的，不了了之了。