用1.073的percoll分离兔子骨髓MSC，求助配置1.073g/ml的GE公司percoll的具体方法？

ytumuyangren

因全骨髓培养获取兔子骨髓MSC存在一定的弊端，因此在实验过程中想采用密度梯度离心的方式来分离MSC，看到有关兔子MSC分离所采用的percoll的密度梯度是1.073g/ml，查阅了一些配制1.073g/mlde percoll的资料，有不同的解释。: h5 i0 O3 i; }6 P# _7 s8 P+ Q
方法一：
& P! E) U1 h) _1 Y2 v- C+ o1.先用9份Percoll与1份8.5％ NaCl或1.5M PBS混合达到生理性渗透压；
+ I' D- b  d+ T/ r7 Z2.然后用生理溶液(0.85％ NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度：56体积percoll：44体积NaCL或PBS。
9 d3 B  Z; `! I方法二：3 _4 W. G; R7 K* w# w, n, `/ C
9ml percoll原液+1ml8.5%的NaCl=工作液
7 {" s8 G) d' R1 h$ w10ml工作液+7.9ml 生理盐水=1.073的percoll ( E" F; v7 e7 }+ `0 o$ T8 w
特此请教各位大侠，帮忙解决一下，不胜感激。

pengxuleo

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0 N0 B- l& }1 y
( R/ c: o0 j+ o& W& J# \" t4 J你说的挺清楚的，按照你写的配置就可以了，两个方法都可行。一般情况下都是用10XPBS配成90%的母液，然后在做梯度离心前，用1xPBS或者生理盐水或者基础培养基配到你所需要的密度，在室温下进行梯度离心。

ytumuyangren

回复 pengxuleo 的帖子3 |  X, D" h6 a' n8 l5 n/ R; v* S
1 r! R. S" Q5 @0 o* w6 a5 v' D
嗯，谢谢pengxuleo的指点，今天试了一把，看到了传说中的雨雾层，分离后洗了一遍离心接种到T25的培养瓶中，明天看看效果，呵呵，希望能够成功。另外，我今天下了一份GE公司的percoll配制说明，讲解的还比较详细，里面有具体的公式。改天传上来给大家分享一下。

pengxuleo

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$ P8 @% L* A* _# E/ c
1 @0 T3 u, W* m, P8 A呵呵，祝你成功

644414915

我们没分离，也养出来了，长得贼快不到两天就要传代
$ R" g5 ~  ~$ l

644414915

但是现在让小鼠间充质干细胞把我给难道了，谁要是能养出来，我真服了

ytumuyangren

回复 644414915 的帖子* Z- m, m5 ]* c! E1 C8 C8 `

1 {" C$ P3 J9 ?  x那你们养出来的细胞有没有鉴定？

ytumuyangren

最近一直忙的做实验，没有及时更新实验的最新进展，元旦前后又做了几次，都能分出单核细胞，但是分出的细胞长的太慢，呵呵，还没有达到消化传代的要求，再养养，等细胞传到p3以后再做做鉴定。

644414915

回复 ytumuyangren 的帖子- O( m8 T( w% a
" Y( r* N( }& h1 ^' d
鉴定了，因为鉴定有神经方面mark表达，然后一个老师看了后把我细胞扔掉了；后来转做小鼠了。

644414915

3 ?! ]! K9 d. J0 o

/ U6 p& t# R+ O  k; E8 {回复 ytumuyangren 的帖子
; A, {% J. K2 H  a# Z) b: B/ A) M* }5 s
关键这**吧实验简单结果居为己有，因为在人家地盘做实验所以只能低三下四的，不了了之了。