用1.073的percoll分离兔子骨髓MSC，求助配置1.073g/ml的GE公司percoll的具体方法？

ytumuyangren

因全骨髓培养获取兔子骨髓MSC存在一定的弊端，因此在实验过程中想采用密度梯度离心的方式来分离MSC，看到有关兔子MSC分离所采用的percoll的密度梯度是1.073g/ml，查阅了一些配制1.073g/mlde percoll的资料，有不同的解释。0 f) i7 {9 F/ w) X
方法一：& I& ]+ |$ O% n4 ~
1.先用9份Percoll与1份8.5％ NaCl或1.5M PBS混合达到生理性渗透压；2 k7 R0 D/ }& s' [
2.然后用生理溶液(0.85％ NaCl或0.15M PBS)稀释到所需浓度：56体积percoll：44体积NaCL或PBS。+ h  {! W4 V% E9 U
方法二：% r( A9 c5 b& r9 ], H4 c7 m1 L
9ml percoll原液+1ml8.5%的NaCl=工作液
$ M2 E. w/ a8 s2 a9 e1 C& U. n10ml工作液+7.9ml 生理盐水=1.073的percoll 3 u4 _) I( Y) a" p% L* T
特此请教各位大侠，帮忙解决一下，不胜感激。

pengxuleo

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& s# A( n8 m  Y: N
( Q' T' K: n0 X你说的挺清楚的，按照你写的配置就可以了，两个方法都可行。一般情况下都是用10XPBS配成90%的母液，然后在做梯度离心前，用1xPBS或者生理盐水或者基础培养基配到你所需要的密度，在室温下进行梯度离心。

ytumuyangren

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/ T9 ?4 B- S: x. \
, M1 B& V& _" U$ B# V' a嗯，谢谢pengxuleo的指点，今天试了一把，看到了传说中的雨雾层，分离后洗了一遍离心接种到T25的培养瓶中，明天看看效果，呵呵，希望能够成功。另外，我今天下了一份GE公司的percoll配制说明，讲解的还比较详细，里面有具体的公式。改天传上来给大家分享一下。

pengxuleo

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) K% f& g% q7 S+ k9 x, h" P1 F4 k4 m8 m
呵呵，祝你成功

644414915

我们没分离，也养出来了，长得贼快不到两天就要传代* J8 F3 H' E& ?, C3 P

644414915

但是现在让小鼠间充质干细胞把我给难道了，谁要是能养出来，我真服了

ytumuyangren

回复 644414915 的帖子% H) j7 S% o  @, v- C. A

' T7 K' g' B& ~2 L1 g. e那你们养出来的细胞有没有鉴定？

ytumuyangren

最近一直忙的做实验，没有及时更新实验的最新进展，元旦前后又做了几次，都能分出单核细胞，但是分出的细胞长的太慢，呵呵，还没有达到消化传代的要求，再养养，等细胞传到p3以后再做做鉴定。

644414915

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7 J9 m& N; I6 [$ E; P4 \
; r- @5 }& a$ z- K: `鉴定了，因为鉴定有神经方面mark表达，然后一个老师看了后把我细胞扔掉了；后来转做小鼠了。

644414915

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5 Z; O, s  f4 a, G
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, {7 D( x$ r) ~% L+ k5 E0 l& ?7 R: ~7 o+ y
关键这**吧实验简单结果居为己有，因为在人家地盘做实验所以只能低三下四的，不了了之了。