做流式鉴定的抗体可以做免疫荧光？？？

huajie881026

今天看一篇文献，第一次看到居然用CD105-PE做了荧光，用的直接标记法，图还挺好看，想问一下大侠，做流式的抗体可以做免疫荧光吗？查了BD的网站，有的既可以做流式又可以做荧光，我买的抗体上面只写了流式，这样是不是说明不能做了呢？做流式的抗体和做荧光的抗体有什么区别吗？？？在此请教！

sun_happone

流式抗体比较容易淬灭。做免疫荧光的话，在同等条件下，当然选择做荧光抗体啦，但实在没有，流式抗体还是可以用的，不过最好马上去荧光显微镜下看结果，时间长了不是很好。我用过流式抗体做荧光染色，效果还可以。

huajie881026

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9 t2 [2 K4 }5 c: ]% D4 m
请教具体步骤怎样？
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huajie881026

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0 e5 s" J! O3 J: A/ }! z7 g* P
用4%PFA固定细胞10min，PBS洗3次，然后1%BSA封闭1h，再用抗体标记可以吗？
4 ^0 b# r) ?- j. r0 e. }, i如果我需要用DAPI染核岂不是要用Triton-X100破膜处理？

meister

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6 ]4 Q( D4 L* i* m+ G6 _5 Q
; |/ _$ U0 I4 ]: |" g7 M* f! b1 o当然可以了， 不过荧光抗体不一定能做流式

meister

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2 Y3 G! ]6 Y( p  J4 z& _6 aPFA固定，都要破膜处理

sun_happone

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  {) \% X# u( a
是否要破膜，要看你在膜上表达还是在核内，如果在膜上，就不需要破膜，染DAPI不需要破膜的，另外，封闭的话做好用3%BSA，有血清BLOCK更好。

huajie881026

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6 H: B+ F# h2 t
, a) r1 s1 m' o; L$ e8 [那抗体稀释比例多少较好呢？

sun_happone

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8 C6 L" k& v' D/ m* N" \* T( a; P2 b
这个看说明书就好了，没有特定的稀释比例的，每个抗体不一定一样。

receiver1

流式和免疫荧光的原理是相同的，做流式的抗体一般可以用于免疫荧光。但由于流式抗体很多都是直标的，抗体直接带标记，因此容易淬灭。而普通抗体选用二抗，实际上有一定的信号放大作用，信号相对较强。当然如果流式抗体不是直标而是选用二抗的话，那就一样了。我一般不用直标的抗体，而是自己根据流式细胞仪的信号通道选用抗体，因为有的时候需要同时用几种抗体，间标（用二抗）的选择起来灵活些。