做流式鉴定的抗体可以做免疫荧光？？？

huajie881026

今天看一篇文献，第一次看到居然用CD105-PE做了荧光，用的直接标记法，图还挺好看，想问一下大侠，做流式的抗体可以做免疫荧光吗？查了BD的网站，有的既可以做流式又可以做荧光，我买的抗体上面只写了流式，这样是不是说明不能做了呢？做流式的抗体和做荧光的抗体有什么区别吗？？？在此请教！

sun_happone

流式抗体比较容易淬灭。做免疫荧光的话，在同等条件下，当然选择做荧光抗体啦，但实在没有，流式抗体还是可以用的，不过最好马上去荧光显微镜下看结果，时间长了不是很好。我用过流式抗体做荧光染色，效果还可以。

huajie881026

回复 sun_happone 的帖子
$ g( {- P, o, H8 R$ E3 v( u( M0 I! W" M+ E/ p# d/ R
请教具体步骤怎样？
( Y* r3 ~: t& q) o

huajie881026

回复 huajie881026 的帖子
% F" U& y( s0 E/ X3 k% Q$ Y& @- u; C- `, Z; x0 k
用4%PFA固定细胞10min，PBS洗3次，然后1%BSA封闭1h，再用抗体标记可以吗？/ _, O# ]. x4 p5 a
如果我需要用DAPI染核岂不是要用Triton-X100破膜处理？

meister

回复 huajie881026 的帖子
! w" z) {5 T+ @6 k
: B8 ^4 g" H, O" U当然可以了， 不过荧光抗体不一定能做流式

meister

回复 huajie881026 的帖子
0 ]' q% ~7 B: Q6 \/ e! P
& N: S3 A: M1 |$ g/ e9 [( }8 L7 aPFA固定，都要破膜处理

sun_happone

回复 huajie881026 的帖子
5 `1 E9 h2 X& E  q8 e, }# O8 A4 N2 \  Y7 N0 A
是否要破膜，要看你在膜上表达还是在核内，如果在膜上，就不需要破膜，染DAPI不需要破膜的，另外，封闭的话做好用3%BSA，有血清BLOCK更好。

huajie881026

回复 sun_happone 的帖子7 B1 K( f- q, @5 f/ a  ]

& u! z& w3 K% j5 a+ p  z那抗体稀释比例多少较好呢？

sun_happone

回复 huajie881026 的帖子
0 J& [# F6 ~. f1 e1 W' P# n
3 }. X; C* O: F: O" K7 D' [这个看说明书就好了，没有特定的稀释比例的，每个抗体不一定一样。

receiver1

流式和免疫荧光的原理是相同的，做流式的抗体一般可以用于免疫荧光。但由于流式抗体很多都是直标的，抗体直接带标记，因此容易淬灭。而普通抗体选用二抗，实际上有一定的信号放大作用，信号相对较强。当然如果流式抗体不是直标而是选用二抗的话，那就一样了。我一般不用直标的抗体，而是自己根据流式细胞仪的信号通道选用抗体，因为有的时候需要同时用几种抗体，间标（用二抗）的选择起来灵活些。